[发明专利]碱解-酶解法结合絮凝沉淀法提取硫酸软骨素钠

说明书

技术领域

本发明所属领域为生化制药领域，涉及一种硫酸软骨素钠的提取方法，特别是一种硫酸软骨素钠生产工艺方法。

背景技术

硫酸软骨素钠是从动物软骨组织中提取制备的一种酸性粘多糖类物质，属糖胺聚糖。临床主要用于调血脂药、关节炎、滴眼液等。硫酸软骨素钠是目前市场上较为重要的一种生化药物，被收载在《中国药典（2010版）》中。近年来，硫酸软骨素钠作为保健品消费的趋势逐渐升温，使其应用领域越来越广泛。

传统的提取工艺方法采取碱解、酶解、盐解及离子交换树脂或其组合的方法进行提取，提取效率低，操作繁琐，提取液中仍含有大量蛋白质和核酸等杂质，给进一步纯化带来一定的难题。

发明内容

本发明的目的提供一种提取硫酸软骨素钠的方法，即碱解-酶解法结合絮凝沉淀法，可有效去除提取液中残存的杂质，有效简化精制工序，节约沉淀步骤中乙醇用量，可在更短的时间里生产出杂质含量低、收率好的硫酸软骨素钠产品。

本发明的目的通过以下技术方案来达到，依次通过以下几个步骤来实现。

（1）软骨浸泡：将猪鼻骨干骨加入到反应罐中用水完全浸没，浸泡3-5小时后，放干浸泡水；

（2）碱解：加入碱液，干骨重量与碱液重量的比为1:2-1:3，搅拌提取3-5小时后，用100目尼龙网过滤；

（3）酶解：调节pH8-9后，升温至45℃，加入猪源胰酶和氯化钠，45-50℃保温3-5小时；

（4）急升温：升温至80-85℃，静置15-20min，用滤袋过滤；

（5）按体积比20%-30%的比例向过滤液中加入95%乙醇；

（6）絮凝沉降：控制温度40-50℃，调节pH11-12，按0.3%-0.5%(质量/体积)比例加入絮凝沉淀剂，静置直至分层，虹吸上清，沉淀物离心后合并母液至上清液中，弃去离心渣；

（7）经脱色处理、乙醇沉淀后，脱水烘干，即得分离纯化的硫酸软骨素钠。

本技术方案的有益效果是：经碱解-酶解法结合絮凝沉淀法制得的硫酸软骨素钠，含量在90%以上，收率≥30%。

（1）本技术方案中，酶解步骤（3）中加入氯化钠，其重量与干骨的重量比为3%-5%。可增强酶解效果，使硫酸软骨素钠与蛋白等杂质有效分离。

（2）本技术方案中，碱解步骤（2）中所用碱液的浓度为1-2mol/L，可降低碱液对硫酸软骨素钠的破坏，提高收率。

（3）本技术方案中，酶解步骤（3）中加入的猪源胰酶重量与干骨的重量比为1%-2%，保温时间为3-5小时，可减少胰酶对硫酸软骨素钠的破坏，提高收率。

（4）本技术方案中，絮凝沉降前向滤液中加入乙醇，该乙醇浓度为95%，且与滤夜的体积比为20%-30%。这样可增加蛋白核酸等杂质与絮凝沉淀剂的结合，增加颗粒度，有助于沉降。

（5）本技术方案中，絮凝沉淀剂选自羟基磷灰石（HAP）和十二烷基磺酸钠（SDBS）或其混合物，可有效结合蛋白核酸等杂质并形成沉淀物，经离心后去除。

具体实施方式

以下实例详细说明了本发明：

（1）软骨浸泡：将100Kg猪鼻骨干骨加入到反应罐中用水完全浸没，浸泡4小时后，放干浸泡水；

（2）碱解：加入1mol/L碱液250L，搅拌提取4小时后，用100目尼龙网过滤；

（3）酶解：调节pH8.5后，升温至45℃，加入胰酶1Kg，加入氯化钠3Kg，45-50℃条件下保温4小时；

（4）急升温：升温至80℃，静置20min后，用滤袋过滤；

（5）向过滤液中加入95%乙醇80L；

（6）絮凝沉降：控制温度45℃，调节pH=11，加入絮凝沉淀剂1.2Kg，静置分层后虹吸上清，沉淀物离心，合并母液至上清液中，弃去离心渣；

（7）经脱色处理、乙醇沉淀后，脱水烘干，得分离纯化的硫酸软骨素钠32.5Kg，含量为95%，收率为32.5%。