[发明专利]一种猪肉中过氧化物酶的快速定量检测方法

说明书

技术领域

本发明属于食品卫生与安全技术领域，特别涉及一种猪肉中过氧化物酶的快速定量检测方法。

背景技术

随着社会发展和人民生活水平的不断提高，各国政府和消费者对食品安全问题日益关注。如何保证食品安全，确保食品消费者的健康，已成为政府主管部门、肉类食品生产部门以及食品检验检疫工作者共同思考的问题。

病死猪肉是指法律法规规定的，患有对人体有害的传染性疾病、寄生虫病和中毒性疾病的生猪，非经屠宰死亡的生猪以及经检疫检验不合格、不能食用的猪肉及其肉类产品。对于市场上来源复杂的病死猪肉及其产品，我国现行的病死猪肉的检测和鉴别还相当缺乏。

肉品的卫生检验是一个比较复杂的过程，主要包括肉品新鲜度检验和肉品健康度检验。目前市场检疫中心对于病死猪肉的检验方法主要包括感官检验、理化检验和细菌学检验。

感官检验主要包括视检、嗅检和触检，主要检查肉品的杀口状态、放血程度、血液坠积情况、组织和淋巴结病理变化以及肉品异常气味等。检验方法虽然简单，但多凭经验判断且主观性较强，对一些隐性感染和无临床症状的染疫肉品很难检出，肉品检出合格率低。细菌学检验主要检查肉品所含有的致病细菌的种类和数量，细菌学检验方法实验条件要求严格，对实验人员的技术有一定要求，难以达到快速或现场检验病死畜禽肉的目的。

理化检验方法主要有PH值测定法、过氧化物酶法、硫酸铜蛋白沉淀法、细菌内毒素氧化呈色法等，这些方法各有其优缺点，均可以从某些侧面反映肉品的健康状况。其中硫酸铜蛋白沉淀法和细菌内毒素氧化呈色法是定性检验病死畜禽肉的主要方法，虽然检测效果相对较好，但是只能满足定性检测的要求，有较大的主观性，并且检验程序较为复杂；其他化学显色的方法也是通过简单的目测和经验比较方式对病死畜禽肉的性质和情况进行判断，无法提供准确的图谱和定量化数据，科学性和准确性较差。

因此在建立健全畜禽产品质量安全管理体系的基础上，建立一种病死猪肉标准化的快速检测技术和方法，已成为我国迫切需要解决的重要问题。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，其目的在于提供一种猪肉中过氧化物酶的快速定量检测方法。

为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一种猪肉中过氧化物酶的快速定量检测方法，其特征在于，所述的检测方法包括以下步骤：

(1)配制一系列以辣根过氧化物酶为标准酶的标准酶溶液；

(2)以过氧化脲为反应底物，以3,3’,5,5’-四甲基联苯胺为显色剂，以磷酸二氢钠缓冲液为缓冲液，分别测试步骤(1)中所配制的标准酶溶液，测试的反应温度为20-30℃，反应pH值为4.0-5.0，反应时间为30-90s，反应结束后加入稀硫酸溶液，终止反应，获得反应产物溶液；

(3)将各反应产物溶液置于紫外分光光度计中，在450nm的吸收波长下分别测定其OD值，获得辣根过氧化物酶浓度-OD值的标准曲线；

(4)测试待测猪肉中过氧化物酶反应后其反应产物溶液的OD值，根据标准曲线计算出猪肉中过氧化物酶的浓度。

步骤(1)中所述标准酶溶液的浓度为0.001-0.128μg/mL。

步骤(2)中所述的过氧化脲的浓度为0.94g/100mL，3,3’,5,5’-四甲基联苯胺的浓度为0.15g/100mL，磷酸二氢钠缓冲液的浓度为1g/mL，pH值为4.0-5.0。

步骤(2)中所述反应温度为25℃，反应pH值为4.5，反应时间为60s。

步骤(2)所述稀硫酸溶液的浓度为1-3mol/L。

步骤(4)中所述待测猪肉中过氧化物酶的提取步骤为：

(1)猪肉样品的采集：猪肉样品按照通脊肉、五花肉、前臀尖、前腿肉、后臀尖和后腿肉的六个部位等份采集猪肉样品；

(2)猪肉中过氧化物酶提取液的制备：采集后的猪肉样品分别去除脂肪和结缔组织后，剪碎均匀，加入3-8倍猪肉样品量的蒸馏水搅拌均匀后，置于摇床上摇晃15-25min，过滤，滤液即为待测猪肉中过氧化物酶的提取液。

所述检测方法中待测猪肉的存放时间不超过3d。

所述检测方法待测猪肉中病死猪肉的过氧化氢酶含量高于健康猪肉中过氧化氢酶的含量。

本发明的有益效果为：所述的检测方法是猪肉中过氧化物酶快速定量的检测方法，最低检测限为0.001μg/mL，符合方法学评价标准，且检测方式简单易行，可以用于农贸市场上病死猪肉的检测与鉴别，以评定农贸市场猪肉的品质。

附图说明