[发明专利]抗B淋巴细胞刺激因子单克隆抗体及其制备方法和用途

说明书

本申请属于基因工程抗体领域。本发明提供了一种抗人B淋巴细胞刺激因子单克隆抗体、含有所述抗体的药物组合物和诊断试剂及其用途。所述单克隆抗体与人B淋巴细胞刺激因子具有高亲和力，可用于自身免疫病的治疗和诊断。

背景技术

目前抗体药物发展迅速，2013年全球十大畅销药物中就有五个是单抗药物，而于2011年3月9日被FDA批准上市的Belimumab是近50年来第一个获准的用于治疗SLE的药物，预计至2015年，其销售总额将高达30亿美元，这无疑又是一颗重磅炸弹，因而在未来的临床治疗上，抗体药物的需求将会越来越大。单链抗体(single chain variable fragment，ScFv)是通过基因工程将抗体的重链可变区(variable region of heavy chain，VH)与轻链可变区(variable region of light chain，VL)通过一段连接肽而形成的一种重组蛋白。单链抗体既保持了亲本抗体与抗原的结合特异性和相当的亲和力，又有其分子量小、半衰期短、免疫原性更低等特点，并且单链抗体不具有完整抗体的Fc段，因而其不易与具有Fc受体的靶细胞结合且能更易进入肿瘤组织和细胞，发挥相应的作用。

B淋巴细胞刺激因子的过表达与多种自身免疫性疾病有着密切的联系，如系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus，SLE)，肖格伦综合征(Sjogren'sSyndrome，SS)，类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis，RA)，重症肌无力(Myasthenia Gravis，MG)等等。以BLyS为作用靶点的药物，尤其以贝利木单抗为代表的单抗药物等，在治疗SLE等自身性免疫疾病方面取得非常好的临床效果。BlyS具有明显的B细胞趋向性并能特异性的结合B细胞，其对于B细胞的增殖、分化、成熟以及生存等方面发挥着非常重要的调控作用，而BLyS对由B细胞介导的自身免疫性疾病的过程以及T淋巴细胞瘤起着重要的影响。

BLyS可大量发现于外周血及淋巴组织细胞的培养上清中，其主要表达于诸如中性粒细胞、巨噬细胞、单核细胞、树突状细胞等先天固有的免疫细胞中；在IFNγ、IL-10以及G-CSF(granulocyte colony-stimulating factor，G-CSF)等细胞因子的刺激下会增强B LyS的表达。

虽然目前噬菌体抗体库为相对最成熟且应用最多的抗体库技术，但是噬菌体抗体库属于原核表达体系，与真核表达体系存在差异，而表达系统差异越大，抗体改构后的活性发生改变的可能性就越大。哺乳动物细胞抗体库属于真核表达体系，它具有原核表达体系所不具备翻译后修饰功能，而这也是决定蛋白生物活性的关键之一。由于本实验室构建的哺乳动物细胞抗体库是应用人源293T细胞建库，因此获得的抗体最近接天然人源抗体，在保证亲和力的同时，也使所获的候选抗体的免疫原性大大降低。

发明内容

本发明的目的在于提供能抗B淋巴细胞刺激因子抗体。

本发明提供了一种抗人B淋巴细胞刺激因子单克隆抗体，其具有选自下列可变区：(a)重链可变区包括SEQ ID NO:4所示氨基酸序列；(b)轻链可变区包括SEQ ID NO:9所示氨基酸序列；(c)重链可变区包括SEQ ID NO:4所示氨基酸序列，且轻链可变区包括SEQ IDNO:9所示氨基酸序列；(d)重链可变区与SEQ ID NO:4所示氨基酸序列具有至少90％同一性；或(e)轻链可变区与SEQ ID NO:9所示氨基酸序列具有至少90％同一性。

因此，目标抗体可能包含a)一个重链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO:4所示序列至少有约91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的一致性和b)一个轻链可变区，其氨基酸序列与SEQ ID NO:9所示序列至少有约91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的一致性。

在一个优选实施方案中，所述本发明所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:4，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:9。