[发明专利]从猪皮中提取透明质酸的方法

说明书

技术领域

本发明方法涉及猪皮深加工技术领域，具体涉及一种透明质酸的提取方法，一种以猪皮为原料，通过生物酶解技术，从而提取透明质酸的方法。

背景技术

透明质酸（Haluronicacid、HA）又名玻璃酸，是一种酸性粘多糖，1934年美国Meyer等首先从牛眼玻璃体中分离出该物质。透明质酸是由N-已酰氨基葡萄糖及D-葡萄糖醛酸的重复结构组成的线形多糖结构。

透明质酸具有很大粘性，对骨关节具有润滑作用。还能促进物质在皮肤中的扩散率、调节细胞表面和细胞周围的Ca2+，Mg2+，K+,Na+离子运动。在组织中的强力保水作用是其最重要的生理功能之一，故被称为理想的天然保湿因子，其理论保水值高达800ml/g，在结缔组织中的实际保水值为80ml/g。此外，透明质酸还有促进纤维增生、加速创伤愈合作用。

透明质酸作为药物主要应用于眼科治疗手术，如晶体植入、摘除，角膜移植，抗青光眼手术等，还用于治疗骨关节炎、外伤性关节炎和滑囊炎以及加速伤口愈合。透明质酸在化妆品中的应用更为广泛，它能保持皮肤湿润光滑、细腻柔嫩，富有弹性，具有防皱，抗皱、美容保健和恢复皮肤生理功能的作用。

透明质酸的生产工艺主要分为两大类：以动物组织为原料的提取法和细菌发酵法。国内目前几个以鸡冠为原料生产透明质酸的厂家，因原料有限，无法形成规模。国内目前有2家发酵法生产透明质酸的企业。每年产量不足2000公斤，根本不能满足国内的需求，国内主要名牌化妆品如奥丽斯、永芳都用到透明质酸，但由于国内产量有限，因此目前化妆品用透明质酸主要依靠进口。

陆文雄等曾在1999年发表过一篇名为《猪皮透明质酸的制备研究》的论文，里面较详细的介绍了一种用猪皮制备明质酸的方法，其得到的透明透质酸符合相关质量标准，采用本专利方法制备的透明质酸质量比陆文雄等制备的略高一筹，收率大大提升。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供了一种从猪皮中提取透明质酸的方法，是一种以扩大原料来源，形成规模化生产链，同时又简化工艺，通过对参数的修改来提高收率，并节能省时为目的而开发出来的新方法，该方法包括如下步骤：

（1）粗提：冰冻猪皮解冻后用丙酮脱水后粉碎，加水用胶体磨磨成糊状，按每1kg猪皮加水6～8L，加氯化钠80～100g，搅拌加热至80～90℃，保温10～20min，冷却至40～50℃，用滤布加硅藻土加压过滤，得澄清滤液。

（2）除蛋白，沉淀：粗提液按体积比为1：（0.5～1.5）比例与氯仿混合搅拌3h，分出水相，按体积比为1:（1.5～3.0）比例加95%乙醇，收集沉淀，丙酮脱水，真空干燥，得粗品透明质酸。

（3）酶解：粗品透明质酸溶于0.1mol/L氯化钠，溶解浓度为0.5%～1.5%，用1mol/L盐酸调pH4.0～5.0，按体积比为1:（0.5～1.5）比例加入氯仿搅拌，分出水层，用稀氢氧化钠调pH7.0～8.0，加蛋白水解酶，于30～40℃，酶解20～30h。

（4）络合、解离、沉淀：酶解液中先按体积比为1:（0.5～1.5）比例加入氯仿除杂蛋白，然后按体积比为1:（0.5～1.5）比例加入1%氯化十六烷基吡啶（CPC），放置后，收集沉淀，用0.4mol/LNaCl解离，离心，取出清液，按体积比为1:（2～4）比例加入95%乙醇，收集沉淀，丙酮脱水，真空干燥，得精品透明质酸。

与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是：

本发明采用猪皮为原料提取透明质酸，打破了市场素以鸡冠为原料生产透明质酸的现状，而且猪皮来源广，其中透明质酸又含量丰富，可以形成规模化的生产链，以满足市场对透明质酸的需求。与陆文雄等的方法相比，本发明方法所制得的透明质酸收率大大提升，质量也略有上升。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

（1）粗提：取冰冻猪皮20kg，解冻后用丙酮脱水后粉碎，加纯化水用胶体磨磨成糊状后，加纯化水120L，加氯化钠1600g，搅拌加热至80℃，保温10min，冷却至40℃，用滤布加硅藻土加压过滤，得澄清滤液117.6L。

（2）除蛋白，沉淀：粗提液与氯仿58.8L混合搅拌3h，分出水相117.3L，加95%乙醇176L，收集沉淀，丙酮脱水，真空干燥，得粗品透明质酸216g。