[发明专利]一种裂谷热病毒IgG抗体的间接免疫荧光检测方法

说明书

本发明涉及一种快速、简便、灵敏的裂谷热病毒(Rift Valley fever Virus)IgG抗体的间接免疫荧光检测方法。本发明的检测方法原理是以间接免疫荧光法检测人抗裂谷热病毒病毒糖蛋白抗体。载玻片上是包被能表达裂谷热病毒糖蛋白的293F细胞，阳性对照或阳性样品中抗糖蛋白抗体在结合到细胞表面后，用荧光染料标记二抗捕获后在荧光显微镜下观察，可见绿色的荧光细胞，判定为裂谷热病毒IgG抗体阳性。若样本中无裂谷热病毒抗体，细胞不显示荧光。检测方法包括如下步骤：293F细胞载波片的制备，载波片上加入样本，荧光标记二抗的结合，洗涤，荧光检测，结果判定。本发明能对裂谷热病毒进行快速灵敏的检测，操作简便，通过本发明可大幅度提高出入境口岸一线检验检疫人员的检测效率，对防控外来烈性传染病的输入具有重要意义。

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂技术领域，具体涉及一种裂谷热病毒IgG抗体的间接免疫荧光检测方法。

背景介绍

随着全球经济一体化和贸易自由化，国外的医学媒介生物通过先进的交通工具和国际贸易，可以迅速把传染病从一个国家或地区传向全球，造成国际间传播。近年来,烈性病毒性传染病在世界各国频频暴发流行,对人类健康带来严重威胁,给社会造成巨大经济损失。这些烈性病毒性传染病的频发给我们敲响了警钟,加强对其的研究和监测以及早预防控制是至关重要的。

裂谷热(Rift Valley fever)是由裂谷热病毒引起的人畜共通病，以蚊虫类为媒介或接触传播的急性病毒性感染病。早在1912年在肯尼亚就有关于裂谷热的报告，但直到1930年在肯尼亚裂谷绵羊、牛群发生广泛流行此病才受到瞩目。历史上最出名的动物大流行是发生在1950年的肯尼亚，疫情持续约一年，根据估计当时约有10万只绵羊死亡。1977年在埃及亦发现裂谷热病毒，爆发了动物和人的大规模流行，猜测可能是因为从苏丹进口的牲畜受到感染。西非首次爆发人的裂谷热流行在1987年，其原因可能是塞内加尔河的整建计划导致地势较低的区淹水，改变动物和人之间的交互作用，造成裂谷热病毒传播至人类。2000年9月，沙特阿拉伯和也门爆发流行，是其首次在出现在非洲以外的确定案例。2006年11月，肯尼亚再度传出爆发裂谷热疫情，截至2007年1月7日，已有大约75人因此死亡，另外有183人受到感染。2007年1月20日，报告指出疫情已经由肯尼亚传至索马里，在当地造成14人死亡。

裂谷热有人体疫苗，然而直到2010年为止，尚未广泛使用。一旦感染，则没有特定的治疗方法。裂谷热病毒属于白蛉热病毒属。此疾病由接触染病动物的血液、生乳、或是受到已感染蚊子的叮咬而传播。牛、绵羊、山羊与骆驼等动物也会被裂谷热感染，最常见的病媒为蚊子(通常为黑斑蚊属)。目前尚无发现人传人的病例。所以切断传播途径是最有效的预防人类感染裂谷热的方式。在诊断该疾病方面，可借由寻找血液中病毒或病毒所产生的抗体而确诊。

裂谷热病毒在我国尚未流行,但随着我国商贸、旅游业的快速发展,境内外人员交往日益密切,以及动物的进口等影响,烈性病毒输入的危险性日益增高，因此,尽快建立快速简便、特异敏感的检测方法防范裂谷热病毒输入并控制其暴发流行具有重要意义。对裂谷热病毒的检测技术的国内目前研究不多，目前已知的相关研究均采用核酸方法对病毒进行检测，均不够简便、快速。本发明提供的IgG抗体间接免疫荧光法可检测人抗裂谷热病毒糖蛋白抗体，为裂谷热病毒的检测提供了快速，简便，灵敏的免疫荧光检测方法，本发明可大幅度提高进出口口岸一线检验检疫人员的检测效率，最大限度地防止外来输入性传染病的发生。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种快速、灵敏的裂谷热病毒IgG抗体的间接免疫荧光检测方法。本发明的裂谷热病毒IgG抗体的间接免疫荧光检测方法，包括如下步骤：

1.表达裂谷热病毒糖蛋白的293F细胞载波片的制备: