[发明专利]抑制EHD2蛋白表达水平的RNA干扰序列及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一段抑制人或哺乳动物细胞EHD2蛋白表达水平的RNA干扰序列以及以此核心序列为基础的针对EHD2的靶向干扰技术，具体涉及抑制EHD2蛋白表达水平的RNA干扰序列及其应用。

背景技术

RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是由细胞内双链小干扰RNA(smallinterferenceRNA，siRNA)引导的，通过细胞内RNA干扰原理识别具有同源序列的靶点mRNA后引起mRNA的降解或翻译抑制，从而抑制或降低mRNA编码蛋白表达水平的现象，其核心是一段21个核苷酸左右长度的具有靶向性的特异核酸序列，下面统称为核心序列。RNAi是广泛存在于大多数真核生物中，发生于转录后阶段的基因沉默现象。

近年来，人们利用这一原理针对靶基因表达进行阻断，从而产生相应的功能缺失表型用于科学研究，或疾病治疗，形成RNAi技术。根据RNAi原理，既可以在体外直接合成以核心序列为基础的RNA双链(siRNA)转入细胞，也可以利用不同的DNA表达载体携带核心序列在体内表达形成短发夹状RNA(shRNA)，起到特异性识别与降解相应的靶基因mRNA，或封闭其翻译的效果。虽然RNAi技术提供了一种对任何基因进行靶向干预调控的手段，在生物医学基础研究和疾病治疗领域具有重要的应用价值和前景，但其前提是必需针对靶基因对象展开分析、预测和实验筛选，找到一段特异和有效的核心序列，然后以此核心序列为基础，通过如上所述的通用方法实施对靶基因在蛋白水平的表达干扰。

EHD2(C-terminalEHdomain-containingprotein2)属于EH蛋白家族，是一种新型膜转运调控蛋白，对受体内吞及分子转运起关键作用。在肿瘤中，EHD2的表达情况与肿瘤紧密相关，对EHD2表达水平的干预与调控对肿瘤研究及疾病治疗具有重要意义。为了进一步研究EHD2在肿瘤发生发展中的作用以及为EHD2为靶点的肿瘤的基因治疗提供新的技术手段，本发明公布了一段抑制人或哺乳动物细胞EHD2基因表达的RNA干扰序列，这是一段与人或哺乳动物细胞中EHD2mRNA同源的核酸序列，以此序列为核心序列，可以开发出各种基于RNA干扰原理的EHD2干扰技术用于抑制EHD2蛋白的表达水平，包括直接合成siRNA后通过转染(Transfection)技术引入人或哺乳动物细胞，或构建DNA载体通过转染或病毒感染技术引入体外培养细胞或体内细胞等，从而达到降低EHD2蛋白表达水平的目的。

发明内容

为进一步研究EHD2在肿瘤发生发展中的作用以及为EHD2为靶点的肿瘤等疾病的基因治疗提供了一个新的技术手段，本发明提供了一段抑制人或哺乳动物细胞EHD2蛋白表达水平的RNA干扰序列，该RNA干扰序列与EHD2的mRNA互补，具有抑制或降低EHD2蛋白表达的功能。

本发明的目的是通过如下的技术方案来实现的：

通过直接合成以本发明所公开的序列为核心的双链RNA，或通过构建以本发明所公开的序列为核心的DNA表达载体，经转染或病毒感染等常规转基因手段引入人或哺乳动物细胞，利用细胞RNA干扰原理，起到对细胞内EHD2的mRNA的识别降解或蛋白翻译抑制效果。

利用本发明技术，可以对EHD2的生物学作用进一步展开广泛深入的基础研究，并可为以EHD2为靶点的肿瘤等疾病的基因治疗等转化研究与临床应用提供新的有效手段。

该序列的DNA脱氧核糖核酸序列如下：

5’-ACCAAGGACAAGTCCAAATAC-3’,具体为国际通用基因序列号为NM_014601的EHD2基因序列中的第1339至第1359位核苷酸。

与此DNA序列对应的RNA核糖核酸序列为：

5’-ACCAAGGACAAGUCCAAAUAC-3’

其特征是：通过以该核糖核酸序列作为核心序列合成基因干扰RNA片段，或以该脱氧核糖核酸序列作为核心序列构建DNA表达载体，经转基因技术引入人或哺乳动物细胞后，在细胞内产生对EHD2mRNA的特异性识别，从而起到抑制EHD2蛋白翻译、降低EHD2蛋白表达水平的作用。这项技术可以用于对EHD2作用机制的广泛研究，以及进行以EHD2为靶点的肿瘤等疾病的干预与治疗。

有益效果

本发明的有益效果为：

本发明公开了一段抑制人或哺乳动物细胞EHD2蛋白表达水平的RNA干扰核心序列，该序列能够有效地抑制或降低EHD2的蛋白表达，为深入研究EHD2的生物学作用以及为肿瘤等疾病的临床治疗提供了可行的手段。