[发明专利]一种具有聚集诱导发光效应的阳离子基因载体的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种具有聚集诱导发光效应的阳离子基因载体的制备方法，其特征在于，其具体操作步骤为：

1)聚合反应：聚合反应体系在无氧环境下连续进行，聚合反应完成后加入水或者甲醇，或者暴露在空气中，使引发体系失活并且终止聚合，加入的水或者甲醇是四苯基乙烯星形引发剂的质量的200-400倍，然后用乙醚、乙醇或者甲醇沉淀直到形貌变为固体，将其放入真空干燥箱中除去乙醚、乙醇或者甲醇得到粉末状或者絮状的固体；所述的聚合反应体系包括四苯基乙烯星形引发剂、有机溶剂、单体、配体、CuBr；其中单体与四苯基乙烯星形引发剂的质量比为0.001-50，优选0.01-40，更优选0.05-30；配体与四苯基乙烯星形引发剂的质量比为0.01-1.4，优选0.01-1，更优选0.05-1；CuBr与四苯基乙烯星形引发剂的质量比为0.001-1.6，优选0.01-1，更优选0.05-0.08；有机溶剂与四苯基乙烯星形引发剂的质量比为50-500，优选50-450，更优选70-400；

2)开环反应：在30-35℃无氧环境下向步骤1)得到的聚合产物中加入溶剂搅拌溶解，然后加入乙醇胺或/和乙二胺在80-90℃温度下反应30-50min；其中溶剂与聚合产物的质量比为200-500，优选150-450，更优选120-350；乙醇胺或/和乙二胺与聚合产物的质量比为300-600，优选450-600，更优选450-500；

3)步骤2)开环反应后的产物加水透析，最后冷冻干燥即得到具有聚集诱导发光效应的阳离子基因载体，加水量与开环反应后的产物的比例为100-350mL/g。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述的聚合反应体系的各组分加入顺序为：先将四苯基乙烯星形引发剂溶于有机溶剂中，然后加入单体，再加入配体，最后加入CuBr引发活性可控自由基聚合。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述的聚合反应体系的各组分加入顺序为：将四苯基乙烯星形引发剂溶于有机溶剂中，然后加入单体，再加入CuBr，最后加入配体引发活性可控自由基聚合。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中聚合反应温度为0-60℃，优选5-55℃，更优选10-50℃；聚合反应时间为12h-48h，优选12h-24h，更优选20h-24h；

所述的单体为甲基丙烯酸N,N-二甲氨基乙酯、甲基丙烯酸缩水甘油酯、N-异丙基丙烯酰胺中的一种或者几种；

所述的配体为2,2’-联吡啶、1,1,4,7,10,10-六甲基三乙烯四胺、五甲基二乙烯三胺、4,4’-联吡啶中的一种或者几种；

步骤1)所述的有机溶剂选自呋喃类、砜类、亚砜类、酰胺类、醇类中的一种或者几种；

步骤2)所述的溶剂选自二甲基亚砜、二乙基亚砜、二丙基亚砜、二丁基亚砜、二戊基亚砜、二己基亚砜中的一种或几种。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，当使用CuBr聚合反应速率过快时，步骤1)还加入CuBr₂，CuBr与CuBr₂的质量比为3:1-5:1。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的四苯基乙烯星形引发剂结构式如下：

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的四苯基乙烯星形引发剂的制备方法：将四苯基乙烯四羟基衍生物溶解在四氢呋喃中，然后加入三乙胺，最后加入二溴异丁酰溴，反应12-18h，然后在二甲基亚砜中沉淀出四苯基乙烯星形引发剂；其中四苯基乙烯四羟基衍生物与四氢呋喃的质量比为0.02-0.04，优选0.02-0.035，更优选0.03-0.035；四苯基乙烯四羟基衍生物与二溴异丁酰溴的质量比为1-2，优选1-1.5，更优选1-1.2；四苯基乙烯四羟基衍生物与三乙胺的质量比为1-2，优选1-1.8，更优选1-1.5；四苯基乙烯四羟基衍生物与二甲基亚砜的质量比为0.8-1.2，优选0.8-1，更优选0.8-0.85。