[发明专利]斑马鱼测定农药水分散粒剂毒性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及养殖技术领域，尤其涉及一种斑马鱼测定农药水分散粒剂毒性的方法。

背景技术

斑马鱼(Brachydoniorerio)属于脊索动物门辐鳍鱼纲鲤形目鲤科短丹尼鱼属，具有易饲 养、产卵量大、性成熟周期短、个体小易操作等特点，同时斑马鱼基因与人类基因的相似度 高，具有重要的科学研究意义。因此，斑马鱼已成为科学研究中常用的模式生物，广泛应用 于生命科学、毒理学、环境科学和农业科学等领域。斑马鱼胚胎和幼鱼常被用于新化学物质 登记中的急性、亚慢性、慢性毒性试验研究，而斑马鱼成鱼通常被用于农药登记急性毒性试 验研究。

目前，已经广泛采用斑马鱼进行农药环境安全性评价的研究，但是采用斑马鱼作为农药 水分散粒剂毒性筛选模型的研究较少，缺乏相关的研究数据评估模型的实用性和可靠性。因 此，提供一种易操作、实用性强的斑马鱼筛选农药水分散粒剂毒性的方法尤其重要。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种斑马鱼测定农药水分散粒剂 毒性的方法，具有操作简便、实用性强、检测速度快，精确度高等优势。

为解决上述技术问题，提供了一种斑马鱼测定农药水分散粒剂毒性的方法，包括以下步 骤：

(1)将农药水分散粒剂溶解，制成农药储备液；

(2)将所述农药储备液与水混合配制成梯度浓度的混合液，将所述混合液做为斑马鱼的 生活用水，持续培养96h，培养过程中，每隔24h时记录斑马鱼的生物效应参数和所述混合 液的理化参数；

(3)根据斑马鱼的生物效应参数计算农药对斑马鱼的半数致死浓度LC₅₀值，判断农药 水分散粒剂的毒性。

上述的方法，优选的，所述步骤(1)具体为：将所述农药分散粒剂加入水中，进行搅拌 或超生得到所述农药储备液。

上述的方法，优选的，所述步骤(2)中所述斑马鱼选择体长为1～3cm、健康活泼的斑 马鱼。

上述的方法，优选的，在采用斑马鱼测定农药水分散粒剂毒性之前24h内，所述斑马鱼 不喂食，在所述步骤(2)进行的过程中，所述斑马鱼不喂食。

上述的方法，优选的，所述步骤(2)中所述水为曝气水，所述曝气水的硬度为10～240 mg/L，pH为6.0～8.5，溶解氧含量高于空气饱和值的80％。

上述的方法，优选的，所述步骤(2)中，所述生物效应参数为鱼的死亡率和中毒症状； 所述理化参数为混合液的水温、pH值、溶解氧含量。

上述的方法，优选的，所述步骤(2)中，所述培养过程控制水温为21～25℃、每日光 照12～16h、溶解氧含量高于空气饱和值的60％。

上述的方法，优选的，所述农药水分散粒剂的毒性的判断标准为：LC₅₀＞10.0mga.i./L 表示低毒，1.00mga.i./L＜LC₅₀≤10.0mga.i./L表示中毒，0.100mga.i./L＜LC₅₀≤1.00mg a.i./L表示高毒，LC₅₀≤0.100mga.i./L表示剧毒。

上述的方法，优选的，所述一种斑马鱼测定农药水分散剂毒性的方法还设有空白对照组； 所述空白对照组以曝气水为斑马鱼的生活用水。所述空白对照组中斑马鱼的死亡率为0则证 明实验结果可信。

与现有技术相比，本发明的优点在于：

(1)本发明提供了一种操作简便、实用性强的模式生物斑马鱼筛选农药水分散粒剂毒性 的方法，将农药水分散粒剂有效成分充分溶解出来，评价其对斑马鱼的毒性，具有速度快， 精确度高的优点。

(2)本发明提供了一种模式生物斑马鱼筛选农药水分散粒剂毒性的方法，将斑马鱼幼鱼 暴露在农药溶液中，通过观察比较斑马鱼的中毒症状和死亡率，判断农药的毒性。死亡率最 终是通过LC₅₀表征的，而中毒症状可以作为辅助判断措施，准确性更高。

具体实施方式

以下结合具体优选的实施例对本发明作进一步描述，但并不因此而限制本发明的保护范 围。

实施例

以下实施例中所采用的材料和仪器均为市售。以下实施例中采用的曝气水为采用空气曝 气泵曝气处理24h以上的自来水。