[发明专利]一种检测ALDH2基因*2多态性的引物与方法

说明书

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及一种检测ALDH2基因*2多态性的引物与 方法。

背景技术

乙醛脱氢酶（ALDH2基因编码）是酒精代谢的关键酶，其突变可影响酒精代谢进而 引起乙醛等有害物质的堆积，影响身体健康。ALDH2基因*2多态性(NM_000690.3:c.1510G> A,p.Glu504Lys)可导致乙醛脱氢酶酶活性显著降低，乙醛代谢至乙酸速度较慢，促进了体 内乙醛的堆积。ALDH2基因*2基因多态性可导致饮酒后体内乙醛堆积，当血液中乙醛达到一 定浓度时，会出现面红、头痛、心动过速、呼吸苦难等不适，表现为对酒精的不耐受性，称为 面红反应。

硝酸甘油是心绞痛急性发作时的常规首选药物，但该药的临床疗效常因人而异。 研究显示，中国汉族人群中，硝酸甘油含服无效的比例高达25%以上，而ALDH2基因*2多态性 与部分国人含服硝酸甘油治疗心绞痛无效相关。硝酸甘油主要的药理作用是通过舒张血 管，降低心脏前后负荷，扩张冠状动脉，减少心肌耗氧，从而缓解心绞痛症状，而其舒张血管 作用主要是通过释放NO所介导的。研究发现，乙醛脱氢酶是使硝酸甘油活化并释放NO的关 键酶，硝酸甘油需先在体内经乙醛脱氢酶生物转化，然后才能释放出有药理活性的一氧化 氮(NO)，发挥其抗心绞痛作用。ALDH2基因*2多态性导致乙醛脱氢酶酶活性显著降低，从而 影响了硝酸甘油治疗心绞痛的有效率。

检测ALDH2基因*2多态性对硝酸甘油的临床用药及指导人们健康饮酒具有重要的 意义。中国专利申请201510085568.2公开了一种检测ADH1B基因的单一核苷多型性R49H的 基因型和ALDH2基因的单一核苷多型性E487K的基因型的引物组和定序引物，但其用于检测 ALDH2基因*2和ADH1B基因*2多态性准确度不足。现有技术缺少一种检测特异性和灵敏度 高、准确性和精密性好的ALDH2基因*2多态性检测引物及其方法。

发明内容

为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种检测ALDH2基因*2多态性的引物 与方法，具有检测特异性和灵敏度高，准确性和精密性好等优点，实现了ALDH2基因*2多态 性的检测。本发明检测的位点为ALDH2基因*2(NM_000690.3:c.1510G>A，p.Glu504Lys， rs671)。

本发明提供一种检测ALDH2基因*2多态性的引物，包括PCR扩增引物和SNaPshot PCR引物；所述PCR扩增引物为上游引物5’-TGGTGGCTACAAGATGTCG-3’(SEQIDNO.1)和下游 引物5’-GCAGGTCCCACACTCACA-3’(SEQIDNO.2)；所述SNaPshotPCR为针对5’- ACGGGCTGCAGGCATACACT-3’(SEQIDNO.3)。

采用上述技术方案，本发明提供的检测ALDH2基因*2多态性的引物，可以实现 ALDH2基因*2多态性的特异性检测，准确性好。

相应地，本发明还提供一种检测ALDH2基因*2多态性的方法，包括如下步骤：

S1、提取DNA样品；

S2、以步骤S1所述的DNA样本为模板，利用权利要求1中所述的PCR扩增引物进行多重 PCR扩增，并对扩增产物进行纯化，；

S3、以步骤S2所述的纯化后的PCR扩增产物为模板，利用权利要求1中所述的SNaPshot PCR引物进行SNaPshotPCR扩增，并对SNaPshotPCR扩增产物进行纯化；

S4、采用毛细管电泳技术对步骤S3所述的纯化后的SNaPshotPCR扩增产物进行检测， 并对检测结果进行分析，确定SNP位点及其基因型。

优选地，所述步骤S1中的DNA样品为EDTA抗凝外周血的DNA样品。

优选地，所述步骤S2中的多重PCR扩增反应条件包括：98℃预变性3min，98℃变性 10s，58℃退火30s，72℃延伸1min，进行29个循环，最后72℃延伸5min，结束后25℃保温。

优选地，所述步骤S3中的SNaPshotPCR扩增反应条件包括：96℃变性10s，55℃退 火5s，60℃延伸30s，进行25个循环，结束后4℃保温。

优选地，所述步骤S4中，采用GENEMAPPERIDV4.1软件对检测结果进行分析。