[发明专利]一种CYP2D6_G1661C基因多态性的引物及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种CYP2D6_G1661C基因多态性的引物 及其检测方法。

背景技术

CYP2D6是第一个被确认由单基因控制的P450酶，CYP2D6是位于第22号染色体上， 其含有9个外显子和8个内含子，总长为7kb左右，是一个完整的功能性基因。有研究发现， CYP2D6基因上游有2个高度同源的假基因，分别称为CYP2D7P基因和CYP2D8P基因，CYP2D7P 基因与CYP2D6基因有97%的核酸序列同源性，而且带有TATA盒，但是由于在外显子1的第226 位点上插入了一个胸腺嘧啶（T），从而改变了读码框架，使转录提前终止；CYP2D8P基因是一 个含有多个断裂点的突变假基因。CYP2D7P和CYP2D8P基因在人体足迹中均不表达，只有 CYP2D6在肝、肠、肾和人脑中表达。

现代研究发现，肝脏中CYP2D6的含量仅占P450肝脏蛋白总量的2%，但是，它却参与 代谢约25%的临床用药，包括抗抑郁药、抗心律失常药、抗精神病药和镇痛药等。目前已发现 超过100种CYP2D6等位基因的变异，主要是单核苷酸变异、大片段基因的丢失以及多基因拷 贝，这些变异使CYP2D6基因呈现多态性，并决定其代谢表型的多样性，使酶的活性表现为缺 失、降低、正常或是增加等几种类型。

杨汐等人发表了一篇题目为“CYP2D6基因多态性与他莫昔芬治疗”的论文，该论文 表明不同基因型的CYP2D6对他莫昔芬的代谢不同，产生的活性代谢产物(4-羟基他莫昔芬 和Endoxifen)浓度不同，其中PMs(含两个无效等位基因致CYP2D6活性缺失)血浆中活性 代谢产物浓度最低，而UMs(含两个以上正常功能等位基因，即多基因拷贝致CYP2D6活性增 强)血浆活性代谢产物浓度最高。因此，CYP2D6的多态性研究对临床具有重要的意义，成为 目前研究的热点。

发明内容

为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种CYP2D6_G1661C基因多态性的引 物及其检测方法，该引物检测CYP2D6基因G1661C(rs1058164)位点，具有特异性好、灵敏度 高、准确性高等优点，为CYP2D6_G1661C基因多态性提供了一种简单有效的检测方法。

本发明提供了一种CYP2D6_G1661C基因多态性的引物，包括巢式PCR扩增引物和 SNaPshotPCR引物；所述巢式PCR扩增引物包括巢式A轮PCR扩增引物和巢式B轮PCR扩增引 物；所述巢式A轮扩增引物为：针对CYP2D6的上游引物5’-CCAGAAGGCTTTGCAGGCTTCA-3’ （SEQIDNO.1）和下游引物5’-CTGAGCCCTGGGAGGTAGGTAG-3’（SEQIDNO.2）；所述巢式B轮 PCR扩增引物为：针对CYP2D6_G1661C的上游引物5’-CGCAGGTGAGGGAGGCGATC-3’（SEQID NO.3）和下游引物5’-AGGGTTGGAGTGGGTGGTGG-3’（SEQIDNO.4）；所述SNaPshotPCR引物 为：针对CYP2D6_G1661C的SNaPshotPCR引物5’- TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCGAGCAGAGGCGCTTCTCCGT-3’（SEQIDNO.5）。

另外，本发明还提供了一种CYP2D6_G1661C基因多态性的检测方法，包括如下步 骤：

S1提取DNA样品；

S2采用权利要求1所述的巢式A轮PCR扩增引物进行PCR扩增，对巢式A轮PCR扩增产物进 行纯化；

S3以巢式A轮PCR扩增产物为模板采用权利要求1所述的巢式B轮PCR扩增引物进行多重 PCR扩增；

S4采用权利要求1所述的SNaPshotPCR引物进行SNaPshotPCR扩增，对扩增产物进行 纯化；

S5毛细管电泳技术进行检测，对检测结果进行分析，确定SNP位点及其基因型。

进一步地，所述步骤S1中的DNA样品为EDTA抗凝外周血的DNA样品。

进一步地，所述步骤S2中的巢式A轮PCR扩增反应条件包括：阶段1：98℃3min；阶 段2：98℃10s；阶段3：72℃3min；阶段4：返回到阶段2，24个循环；阶段5：72℃5min；阶段 6：25℃保温。