[发明专利]一种依诺肝素钠精品的生产方法

权利要求书

1.一种依诺肝素钠精品的生产方法，其特征在于包括如下步骤：(1)肝素钠粗品用纯化水溶解，调节溶液pH至2.7-3.0，加入亚硝酸钠搅拌15min后调节溶液pH至10.0-10.4，得到降解液，向降解液中加入硼氢化钠搅拌≥15h，调节溶液pH至3.5-4.0搅拌15min，调节溶液pH至7.2-7.8，紫外灯照射降解液，后用乙醇沉淀脱水，真空干燥得到低分子肝素钠粗品；所述肝素钠粗品和纯化水投料比(W/V)为1.0：8.8-9.2；所述肝素钠粗品和亚硝酸钠的投料比(W/W)为100：1.8-2.4；所述亚硝酸钠和硼氢化钠的投料比(W/W)为1.0：0.4-0.6；(2)将上述低分子肝素钠粗品用2％氯化钠溶液溶解后加入层析柱内，以2％氯化钠溶液匀速洗拓，HPLC检测分子量及分布，通过公式计算除去的大、小分子百分比数及相对应体积，收集符合要求的洗拓液并调节pH至7.2-7.8，乙醇沉淀脱水，真空干燥得到低分子肝素钠精品；(3)将分次层析出的低分子肝素钠精品合并，测试其分子量及分布，如果小分子部分有偏差，可调节溶液pH至7.2-7.8，加入乙醇沉淀对小分子片段进行调节，使其达到符合要求，把合格的低分子肝素钠精品加到氧化罐内中，加入纯化水和氯化钠，搅拌溶解；(4)调节低分子肝素钠精品溶液pH至10.0-10.4，加入30％过氧化氢氧化4h，后调节pH至7.2-7.8，加入无水亚硫酸钠，搅拌30min过滤得到依诺肝素钠溶液；(5)调节依诺肝素钠溶液pH5.0-5.5，使其通过0.45μm和0.2μm滤膜除菌，除菌过滤后的依诺肝素钠溶液收集在洁净沉淀罐中；(6)除菌后的依诺肝素钠溶液用乙醇沉淀﹑脱水、真空干燥得到精品依诺肝素钠。

2.根据权利要求1所述的依诺肝素钠精品的生产方法，其特征在于，步骤(1)中肝素钠粗品和纯化水投料比(W/V)为1.0:8.8-9.2；肝素钠粗品和亚硝酸钠的投料比(W/W)为100：1.8-2.4；亚硝酸钠和硼氢化钠的投料比(W/W)为1.0：0.4-0.6；亚硝酸钠反应时体系温度维持在15-30℃，pH2.7-3.0。

3.根据权利要求1所述的依诺肝素钠精品的生产方法，其特征在于，步骤(1)中通过用淀粉-碘化钾试纸测试溶液来确定反应是否结束，调节体系pH的溶液为：4mol/L盐酸，5mol/L氢氧化钠；紫外灯照射波长为254nm，加入溶液体积和乙醇体积之比(V/V)为1.0:0.65-0.75，沉淀出的低分子肝素粗品在生产上需要再用乙醇脱水三次，第一次用的乙醇和投料的肝素钠粗品的比(V/W)为3.5-5.5：1.0，第二次和第三次用的乙醇为前一次用量的55％，每次脱水间隔2.5h以上。

4.根据权利要求1所述的依诺肝素钠精品的生产方法，其特征在于，步骤(2)用2％的氯化钠溶液溶解步骤(1)得到的低分子肝素钠粗品，使最终溶液体积和低分子肝素钠粗品重量(V/W)为7.2-8.0：1.0，再用2％氯化钠溶液洗拓洗拓层析柱，流速约为一个柱床体积/2.5小时，对层析后的洗拓液通过HPLC测试其分子量及分布，再根据公式计算出相对应的需除去的大、小分子面积及相对应的体积，收集的中间洗拓液用其2倍体积的乙醇来沉淀，沉淀物再用乙醇来脱水三次，第一次用的乙醇和投料的低分子肝素钠粗品的比(V/W)为3.5-5.5：1.0，第二次和第三次用的乙醇为前一次用量的55％，每次脱水间隔2.5h以上。

5.根据权利要求1所述的依诺肝素钠精品的生产方法，其特征在于步骤(4)中将上述步骤(3)中的溶液用氢氧化钠调节pH至10.0-10.4，30％过氧化氢和溶液之比(V/V)为0.25-0.45：100，无水亚硫酸钠和过氧化氢(W/V)为0.25-0.35：1.0。

6.根据权利要求1所述的依诺肝素钠精品的生产方法，其特征在于步骤(5)中需要做0.45μm和0.2μm滤膜完整性试验，以确保生产中使用的滤膜能够满足除菌过滤要求。