[发明专利]三叶青侧枝诱导的种苗培育方法

权利要求书

1.三叶青侧枝培养方法，其特征在于，以三叶青带腋芽的茎段作为处理对象，进行如下操作：

（1）无菌材料：剪取三叶青带腋芽的茎段，清洗得到无菌材料；

（2）培养基：以MS或1/2MS作为基础培养基，添加生长素或/和细胞分裂素，分别得到初代培养基、继代培养基和生根培养基，初代培养基、继代培养基与生根培养基中蔗糖含量不同；

（3）初代培养：将步骤（1）中的无菌材料接种到初代培养基上，并露出腋芽，培养30-45天，得到初代无菌苗，含有适量侧枝；

（4）继代增殖培养：将初代无菌侧枝分离，剪取带腋芽带3-6片叶片的侧枝，转接于继代培养基中增殖培养，得继代苗；

（5）壮苗生根培育：继代侧枝分离并转入MS培养基中，进行壮苗培养1.5-3个月后，进入生根培养基，培养10-20天，得生根无菌苗；

（6）驯化：将生根无菌苗移至人工气候室，加水至高于培养基表面，光照驯化培养3-5天；

（7）移栽：将蛭石：草炭土安装2:1的质量比混合，高压灭菌后作为基质，将驯化后的苗洗去培养基，在仅保留顶端叶片的情况下移在基质上，即完成三叶青的培养。

2.如权利要求1所述的三叶青侧枝培养方法，其特征在于：步骤（1）中，所选取的三叶青侧枝是现在人工气候室中培养15-30天后所剪取的新抽出枝条上半木质化的带腋芽侧枝茎节。

3.如权利要求1所述的三叶青侧枝培养方法，其特征在于：步骤（1）中，所述的清洗是指：将剪取的三叶青带腋芽的侧枝流水冲洗1-2小时，洗洁精去油清洗3-5分钟，再依次采用无菌水一道清洗、70%乙醇清洗20-30s，无菌水二道清洗、升汞灭菌8-10分钟，无菌水三道清洗4-5次。

4.如权利要求1所述的三叶青侧枝培养方法，其特征在于：步骤（2）中，所述的初代培养基和继代培养基中，蔗糖质量百分比为2.5-3%；生根培养基中，蔗糖质量百分数为1.5-2%。

5.如权利要求1所述的三叶青侧枝培养方法，其特征在于，步骤（3）中，初代培养基组成为：（1/2-1）MS+（1-1.5mg/L）6BA+（0-0.5mg/L）NAA。

6.如权利要求1所述的三叶青侧枝培养方法，其特征在于，步骤（4）中，所述的继代培养基的组成为：（1/2-1）MS+（1-1.5mg/L）6BA+（0-0.025mg/L）GA+0.025mg/LNAA。

7.如权利要求1所述的三叶青侧枝培养方法，其特征在于：步骤（5）中，壮苗培养采用纯MS培养基。

8.如权利要求1所述的三叶青侧枝培养方法，其特征在于：步骤（5）中，生根培养基的组成为1/2MS+（0.5-1.5mg/L）6BA或1/2MS+（0.5-1.5mg/L）NAA。