[发明专利]分析氟甲基酮及其有关物质的液相色谱法、流动相和套装

说明书

本发明属于分析化学领域，提供一种分析氟甲基酮(Z‑VAD‑FMK)及其有关物质的液相色谱法、流动相和套装，其中使用的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶；使用的流动相由以下流动相A和流动相B组成：流动相A：100～300mM的铵盐和80～250mM的钠盐或钾盐的水溶液，pH为2.5～3.5，流动相B：体积比乙腈:水＝0.5～1.5:1，pH为2.5～3.5；流动相A和流动相B的体积比为：45～15:55～85。本发明方法具体可为高效液相色谱法，可对Z‑VAD‑FMK及其有关物质进行分离及含量分析，为Z‑VAD‑FMK作为药物研究和使用提供了质量可控性，并且操作简单环保。

技术领域

本发明属于分析化学领域，特别涉及一种分析氟甲基酮及其有关物质的液相色谱法，适合分析氟甲基酮及其有关物质的流动相，以及分析氟甲基酮及其有关物质的套装。

背景技术

氟甲基酮(Z-VAD-FMK)，CAS号：187389-52-2，化学名称：N-[苄氧羰基]-L-缬氨酰基-N-[(1S)-3-氟-1-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-2-氧代丙

基]-L-丙氨酰胺，分子式：C₂₂H₃₀FN₃O₇，分子量，467.5，为白色粉未。结构式为：

Z-VAD-FMK是一种半胱氨酸蛋白酶(caspase)抑制剂，能够抑制caspase家族蛋白酶活性和阻断凋亡发生，可能具有预防老年性耳聋、保护人体器官和癌症治疗等作用。目前，已有很多文献报告了Z-VAD-FMK的药效试验和作用机制，例如在以下文献中的报告：李胜利、王玉虎、张敏燕等，小鼠耳蜗毛细胞凋亡方式及Z-VAD-FMK对毛细胞的保护作用，听力学及言语疾病杂志，2015年第23卷第1期：50-56；朱宝昌、盛小辉、刘群、李红卫，广谱caspase抑制剂对大鼠烫伤后肾脏的保护作用，中国现代医药杂志，2014年l1月第16卷第11期：17-20；李红卫、刘群、朱宝昌、盛小辉，Z-VAD-FMK对烫伤大鼠肾脏细胞凋亡的影响，山东医药，2014年第54卷第46期：14-16；夏璐、鲍英、袁耀宗、张学军，全反式维甲酸和Caspase抑制剂Z-VAD-FMK对胰腺癌细胞凋亡的作用，胰腺医学，2003年12月第3卷第4期：198-202；等等。

但是，没有文献公开检测Z-VAD-FMK及其有关物质的方法，因此难以在药物研究和使用中提供可控的质量。

发明内容

本发明首先提供一种分析氟甲基酮(Z-VAD-FMK)及其有关物质的液相色谱法，其中

使用的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶(ostade-cylsilane，ODS或C18)；

使用的流动相由以下流动相A和流动相B组成：

流动相A：100～300mM的铵盐和80～250mM的钠盐或钾盐的水溶液，pH为2.5～3.5，

流动相B：体积比乙腈:水＝0.5～1.5:1，pH为2.5～3.5；

流动相A和流动相B的体积比为：45～15:55～85。

本发明还提供一种用于液相色谱法分析氟甲基酮及其有关物质的流动相，所述流动相由以下流动相A和流动相B组成：

流动相A：100～300mM的铵盐和80～250mM的钠盐或钾盐的水溶液，pH为2.5～3.5，

流动相B：体积比乙腈:水＝0.5～1.5:1，pH为2.5～3.5；

流动相A和流动相B的体积比为：45～15:55～85。

本发明还提供一种用于分析氟甲基酮及其有关物质的液相色谱法套装，包括：

固定相：十八烷基硅烷键合硅胶；