[发明专利]一种同时检测IL28B和ITPA基因多态性的引物及其方法

说明书

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种同时检测IL28B和ITPA基因多态性 的引物及其方法。

背景技术

丙型病毒性肝炎，简称为丙型肝炎，是一种由丙型肝炎病毒（HepatitisCvirus, HCV）感染引起的病毒性肝炎，主要通过血液传播。由于大部分感染丙肝病毒的患者在感染 的急性期无明显症状，因此常常被人们忽视，一般待丙型肝炎转化为慢性丙型肝炎或肝硬 化等顽固疾病时才有所察觉，这样往往会错过丙型肝炎的最佳治疗期。据世界卫生组织统 计，全球约有1.4-1.7亿HCV感染者，我国HCV感染率约为3.2%，约有3800万HCV感染者，而且 每年呈上升的趋势，严重危害人类的健康。

2009年，杜克大学的Ge等在《自然》上发表了一篇与HCV感染相关的全基因组相关 性（genomewideassociationstudy,GWAS）研究论著，报道了IL28B基因位于第19号染色体 短臂（19q13），其编码干扰素λ3（IL28B）上游约3kb附近的单核苷酸多态性rs12979860与聚 已二醇干扰素、利巴韦林联合治疗的效果显著相关。在1型HCV感染者中，C/C基因型患者的 SVR是C/T和T/T型患者的两倍。C/C基因型在人群中的分布呈现明显的种族差异，在黄色人 种中占90%、在白色人种中占51%、在黑色人种中占13%。rs8099917与标准疗法的NVR最为相 关。在1型HCV感染者中，G/G基因型患者对标准治疗方案的失败率是G/T或T/T型患者的2倍。

杜克大学的同一研究组在发现IL28B基因型具有预测抗病毒治疗应答的基础上，通过 GWAS研究发现，肌苷腺苷三磷酸酶（in0sineadenosinetriphatase,ITPA）基因变异可缓解 RBV引起的溶血性贫血，如rs1127354AA和rs7270101CC基因型均为贫血的保护性因子。因 此，通过检测IL28B和ITPA基因多态性有利于预测HCV患者的疗效。

中国专利申请201510007333.1公开了基于实时荧光PCR的IL28B基因多态性检测 试剂盒，所述试剂盒包括IL28Brs8099917型PCR反应液、IL28Brs12979860型PCR反应液， 其通过提取DNA，加入到基于实时荧光PCR的IL28BSNP检测试剂盒的反应液中，利用实时荧 光PCR仪进行检测，通过荧光扩增曲线来判读位点突变类型。

中国专利申请201210353290.9公开了检测IL28B(rs8099917)和ITPA (rs1127354)的突变的方法，其多态性检测用探针包含P1或P1’的寡核苷酸、P2或P2’的寡核 苷酸以及P3或P3’的寡核苷酸，其是通过将探针进行PCR扩增后进行Tm分析，对IL28B基因 多态性的rs8099917和ITPA基因多态性的rs1127354进行分型。

虽然目前的检测方法可以对IL28B和ITPA进行分型，但是上述方法存在检测结果 误差较大，重复性较低，而且结果判断较复杂的缺陷。因此，研究和开发出一种操作简单，检 测结果误差小，结果重复性高的IL28B基因和ITPA基因的检测方法仍是目前研究的热点。

发明内容

为了解决现有技术中存在的缺陷，本发明提供一种同时检测IL28B和ITPA基因多 态性的引物及其方法，该引物主要用于检测IL28B_rs8099917、IL28B_rs12979860、ITPA_ rs7270101、和ITPA_rs1127354四个位点，具有特异性好、灵敏度高、准确性好等优点，为 IL28B和ITPA基因多态性提供了一种简单有效的检测方法。