[发明专利]MYOZ1作为癌症分子靶标中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体地，涉及MYOZ1作为癌症分子靶标中的应用，更具体的涉及MYOZ1作为口腔鳞状细胞癌分子靶标中的应用。

背景技术

口腔鳞状细胞癌(oralsquamouscellcarcinoma，OSCC)为头颈部常见的恶性肿瘤，约占全身恶性肿瘤的3％。口腔鳞状细胞癌的发病因素有很多，如嗜酒，嗜烟及咀嚼槟榔等。其好发部位依次为舌、牙龈、颊、愕、唇、口底。我国每年恶性肿瘤新发病例约152万，死亡105万人，每年新发病例4.56万人。虽癌症治疗己取得进展，临床上的手术方式、功能修复、术后感染控制、辅助放化疗等技术有明显的提高和改善，对口腔癌的早期诊断治疗、发生发展机理、生物治疗、靶向治疗等研究也获得了一些进步，但是，患者的五年生存率仍然没有得到明显的提高，不超过50％，其主要原因是对口腔癌的发生发展、关键调控因素、特异性标记物等不清楚。因此，探讨口腔癌的发生、发展的机理，思考潜在的治疗靶标，研究相应的治疗策略和临床应用可能，对提高患者的生存率和改善预后具有重要的意义。

发明人通过Illumina公司的HiSeq2500高通量测序平台选取2例口腔鳞状细胞癌癌组织、癌旁组织及3例正常组织的转录组深度测序分析，初步筛选出口腔鳞状细胞癌相关基因MYOZ1，进一步RT-PCR实验证实了MYOZ1基因与口腔鳞状细胞癌的关系：MYOZ1与口腔鳞状细胞癌具有很好的相关性，可用于制备口腔鳞状细胞癌辅助诊断或者预后制剂，具有重要的临床实际应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供检测MYOZ1基因和/其表达产物的试剂在制备口腔癌诊断剂中的应用。

进一步，口腔癌为口腔鳞状细胞癌。

为实现上述目的，本发明首先通过高通量测序结合生物信息学方法筛选到候选基因MYOZ1，进一步通过分子生物学方法验证了MYOZ1与口腔癌的关系：MYOZ1在口腔癌患者中低表达，与口腔癌具有很好的相关性，可用于制备治疗口腔癌制剂和/或口腔癌诊断制剂，具有重要的临床应用价值。

本发明的目的在于提供MYOZ1基因在制备口腔癌诊断制剂中的应用。

进一步，口腔癌诊断制剂包括用荧光定量PCR方法、基因芯片方法检测口腔癌患者组织中MYOZ1基因的表达。

荧光定量PCR法是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。荧光定量PCR的出现，极大地简化了定量检测的过程，而且真正实现了绝对定量。多种检测系统的出现，使实验的选择性更强。自动化操作提高了工作效率，反应快速、重复性好、灵敏度高、特异性强、结果清晰。

基因芯片又称为DNA微阵列(DNAmicroarray)，可分为三种主要类型：1)固定在聚合物基片(尼龙膜，硝酸纤维膜等)表面上的核酸探针或cDNA片段，通常用同位素标记的靶基因与其杂交，通过放射显影技术进行检测。2)用点样法固定在玻璃板上的DNA探针阵列，通过与荧光标记的靶基因杂交进行检测。3)在玻璃等硬质表面上直接合成的寡核苷酸探针阵列，与荧光标记的靶基因杂交进行检测。基因芯片作为一种先进的、大规模、高通量检测技术，应用于疾病的诊断，其优点有以下几个方面：一是高度的灵敏性和准确性；二是快速简便；三是可同时检测多种疾病。

用于荧光定量PCR方法检测口腔癌中MYOZ1基因的产品含有一对特异性扩增MYOZ1基因的引物；基因芯片包括与MYOZ1基因的核酸序列杂交的探针。

用于荧光定量PCR方法检测口腔癌中MYOZ1基因的产品可以检测癌组织与癌旁组织中MYOZ1基因的表达，也可以检测癌组织与正常组织中MYOZ1基因的表达。

本发明的目的在于提供MYOZ1基因表达产物在制备口腔癌诊断制剂中的应用。进一步，口腔癌的诊断制剂包括用免疫方法检测MYOZ1蛋白的表达。优选免疫检测方法检测口腔癌中MYOZ1蛋白表达的为westernblot和/或ELISA和/胶体金检测方法。

酶联免疫吸附实验(ELISA)即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。ELISA检测试剂盒根据检测目的和操作步骤可分为间接法、双抗夹心法、竞争法、双位点一步法、捕获法测IgM抗体、应用亲和素和生物素的ELISA。ELISA检测试剂盒中生色底物可选择辣根过氧化物酶(HRP)或者碱性磷酸酶(AP)。