[发明专利]北美红杉离体生根培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种北美红杉离体生根培养方法，属于杉木培养繁殖技术领域。

背景技术

北美红杉原产于美国加尼福尼亚州海岸，最早由尼克松访华时引种至中国杭州。北美红杉属于特大乔木，在原产地可高达110米。北美红杉树姿雄伟，枝叶密生，生长迅速。适用于湖畔、水边、草坪中孤植或群植，景观秀丽，也可沿园路两边列植，气势非凡，是非常优良的园林树种。

但由于北美红杉扦插成活率低，组织培养方法生根阶段困难，国内繁殖的情况罕见报道，因此克服北美红杉培育技术难关，提高离体培养效率，对中国园林植物的丰富具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是为了解决北美红杉扦插成活率低，组织培养生根阶段较困难的问题，提供了一种方法简便易于操作，生根速度较快，成活率较高的北美红杉离体生根培养方法。

本发明采用如下技术方案：一种北美红杉离体生根培养方法，包括如下步骤：

(1)无菌材料的获得：选取当年生的北美红杉枝条为材料，经过消毒、清洗后用无菌滤纸吸干多余水分后接种到MS培养基中，20～22天后腋芽长出无菌苗；

(2)增殖培养：将无菌苗作为材料，切下顶芽或腋芽作为外植体，接种至增殖培养基上，所述增殖培养基的为MS+0.1～1.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+0.1～1.0mg/L萘乙酸+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，pH5.5～6，培养25～30天时间；

(3)壮苗：将增殖的无菌苗切下后，移入壮苗培养基，壮苗培养基为MS+0.1～0.4萘乙酸，PH5.5～6，培养2～3周，温度为16～25℃；

(4)生根培养基的配制：将MS培养基中的大量元素、微量元素、肌醇、有机物的用量分别减至常规用量的1/4，配制成1/4MS培养基；

(5)生根培养：将壮苗后的组培苗接种到生根培养基上，生根培养基为1/4MS+0.1～1.0mg/L吲哚丁酸+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，pH5.5～6，12～16天后，基部长出3～6条主根，主根长度均值达到4.5～6cm；

(6)炼苗与移栽：将高度在2～5cm，根系长度在3～6cm的组培苗进行炼苗，打开瓶盖3～7天，使其适应外界环境，3～7天后洗掉根部的生根培养基，用800～1000倍的多菌灵浸泡1～10min，移栽至大棚内，覆膜保湿，适度遮光。

进一步的，所述步骤(4)中生根培养基的培养条件温度为20～24℃。

进一步的，所述步骤(1)中的消毒、清洗方法为：在超净工作台上用70～75％的酒精消毒10～40s，用无菌水冲洗3～5次，然后用次氯酸钠溶液消毒10～30min，用无菌水冲洗4～6次。

进一步的，所述大量元素为硝酸钾、硝酸铵、七水硫酸镁、磷酸二氢钾和二水氯化钙。

进一步的，所述微量元素为四水硫酸锰、七水硫酸锌、硼酸、碘化钾、七水钼酸钠、五水硫酸铜和六水氯化钴。

进一步的，所述有机物为甘氨酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫铵素和烟酸。

本发明培养方法简单，步骤易于操作，将北美红杉离体生根中壮苗的步骤提前到生根培养之前，有效的提高了组培苗移栽后的成活率，将生根培养基进行改良，能够加速北美红杉离体培养时的生根效率。

具体实施方式

下面将结合具体实施例对本发明作进一步的描述。

实施例一：一种北美红杉离体生根培养方法，包括如下步骤：

(1)无菌材料的获得：选取当年生的北美红杉枝条为材料，在超净工作台上用75％的酒精消毒20s，用无菌水冲洗3次，然后用次氯酸钠溶液消毒10min，用无菌水冲洗4次，然后用无菌滤纸吸干多余水分后接种到MS培养基中，20天后腋芽长出无菌苗；

(2)增殖培养：将无菌苗作为材料，切下顶芽或腋芽作为外植体，接种至增殖培养基上，增殖培养基的为MS+0.1mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+0.1mg/L萘乙酸+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，pH5.5，培养30天时间，温度在16℃；

(3)壮苗：将增殖的无菌苗切下后，移入壮苗培养基，壮苗培养基为MS+0.1萘乙酸，PH6，培养2周，温度16℃。

(4)生根培养基的配制：将MS培养基中的大量元素硝酸钾、硝酸铵、七水硫酸镁、磷酸二氢钾和二水氯化钙，微量元素四水硫酸锰、七水硫酸锌、硼酸、碘化钾、七水钼酸钠、五水硫酸铜和六水氯化钴，肌醇、有机物甘氨酸、盐酸吡哆醇、盐酸硫铵素和烟酸的用量分别减至常规用量的1/4，组成改良后的1/4MS培养基；