[发明专利]用于鉴定凶小库蚊的DNA条形码标准基因及应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种用于鉴定凶小库蚊的DNA条形码标准基因及应用。

背景技术

目前，国内外对媒介生物的分类鉴定主要依靠传统的形态学分类手段。该方法主要针对成虫阶段，对卫生监管实际工作中捕获的其他发育阶段（幼虫、蛹等）的媒介生物则受到限制；对外部形态相似的近缘种媒介生物的鉴定，形态学分类方法的准确度偏低；另外，实际工作中经常会采集到不完整的样品，形态学方法对残缺样品的鉴定遇到很多困难。在口岸检疫工作中，如果截获的是幼虫、卵、蛹等非成虫虫态，通常需要将其培养成成虫后再进行鉴定，整个检疫鉴定过程时间长达数周，也经常会采集到不完整的样品，形态学方法对残缺样品的鉴定遇到很多困难，大大地加长了通关周期，影响贸易往来。

近代分子生物学技术的兴起，为古老的昆虫学科注入了新的活力。在昆虫学研究领域，分子生物学技术主要应用于系统演化及分类鉴定两方面。昆虫系统演化的研究是从分子水平上找出其种间的DNA序列的特异性差异，主要目的为探索昆虫种、属间的相对亲缘关系，同时也为昆虫的分子鉴定奠定了基础。

DNA分类是以生物的DNA序列的差异为依据，来区分生物物种并构建全新的分类学系统(Tautzetal.,2002)。在生物分类中，以DNA序列作为生物物种识别的方法最初应用于病毒、细菌和原生动物类群的研究中，后来这种方法广泛应用于物种多样性的调查研究中，并积累了大量的数据和文献。2003年，DNA条形码概念首次提出：鉴定物种就如同使用商品UPC条形码，使用扫描仪就能识别。它的原理是利用基因组DNA上一段标准的或者大家公认的基因片段，作为分子靶标来进行种级水平的种类鉴定。DNA条形码序列与整个基因组DNA相比要短得多，而且非常容易获得。因为COI基因的通用引物可以很容易获得绝大多数动物的5’端序列，加拿大圭尔夫大学的学者Hebert等提出利用COI的特定区段来做DNA条形编码的基础，用于物种识别(Hebertetal.,2003;Remigio&Herbert,2003)。理论上，DNA序列上的每个位点都有A、T、G、C四种可能，45个碱基的序列就可以区分开近10亿个物种，这远远超过现存物种的总数，即使由于自然选择的原因，某些位点已经被固定，导致组合数减少一些，但是现代分子技术可以很容易的扩增出几百个碱基的序列，足够区分所有的物种(肖金花等，2004)。而且DNA序列属于数字信息，方便管理又具有可重复性，易于交流和联合分析（Hebertetal.,2003）。

DNA条形码技术为物种的鉴定提供了新的手段，弥补了传统分类的诸多不足。尤其适用于难以用形态分类特征进行鉴定的幼虫、卵等虫态。利用分子标记进行种类鉴定国际上已有不少的尝试，国际上第一篇利用DNA条形码进行物种鉴定的是2003年Hebert，随后Ball等(2005)尝试用分子条形码鉴别了70多种水生蜉蝣，游中华等(2007)用线粒体COI鉴别了入侵害虫西花蓟马及其他8种常见蓟马。肖金花等中国卫生检验杂志2011年3月第21卷第3期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology，Mar2011;Vol21No3615(2004)综述了线粒体COI片段在物种鉴定方面的独特优点，并指出DNA条形码技术为生物分类学的新动向。

但由于目前DNA条形码数据库中种类不全，缺乏多个物种的标准DNA条形码参考序列，致使DNA条形码鉴定技术达不到实际应用的目的。

凶小库蚊雌蚊吸人血或牛、猪、马血等，是北方重要骚扰蚊种之一。目前，对凶小库蚊的分类鉴定主要依靠传统的形态学分类手段。该方法主要针对成虫阶段，对卫生监管实际工作中捕获的其他发育阶段（幼虫、蛹等）的媒介生物则受到限制；对与凶小库蚊外部形态相似的近缘种媒介生物的鉴定，形态学分类方法的准确度偏低。在检验检疫现实工作中，经常会截获的是幼虫、卵、蛹等非成虫虫态，通常需要将其培养成成虫后再进行鉴定，整个检疫鉴定过程时间长达数周，也经常会采集到不完整的样品，形态学方法对残缺样品的鉴定遇到很多困难，大大地加长了通关周期。

发明内容

本发明的首要目的是克服上述不足问题，提供一种用于鉴定凶小库蚊的DNA条形码标准基因。

本发明的另一目在于提供一种用于鉴定凶小库蚊的DNA条形码标准基因的应用方法。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：用于鉴定凶小库蚊的ＤＮＡ条形码标准基因，其特征在于：所述用于鉴定凶小库蚊的ＤＮＡ条形码标准基因的核苷酸序列如下所示：