[发明专利]用于鉴定背点伊蚊的DNA条形码标准基因及应用

权利要求书

1.用于鉴定背点伊蚊的ＤＮＡ条形码标准基因，其特征在于：所述用于鉴定背点伊蚊的ＤＮＡ条形码标准基因的核苷酸序列如下所示：

ATTTTATTTTCGGAGTTTGATCAGGAATAGTTGGAACATCATTAAGAATTTTAATTCGTGCTGAATTAAGTCAACCAGGTATATTCATTGGAAATGACCAAATTTATAATGTAATTGTTACAGCTCATGCTTTTATTATAATTTTCTTTATAGTAATACCTATTATAATTGGAGGATTTGGAAATTGATTAGTTCCTTTAATACTAGGAGCTCCAGATATAGCATTTCCTCGAATAAATAATATAAGTTTTTGAATACTACCTCCTTCATTAACACTACTACTTTCAAGTAGTATAGTAGAAAATGGGTCAGGAACAGGGTGAACAGTTTATCCACCTCTTTCTTCTGGAACTGCTCATGCAGGAGCTTCAGTTGATTTAACAATTTTTTCTTTACATTTAGCTGGAGTATCATCAATTTTAGGAGCAGTAAATTTTATTACTACTGTTATTAATATACGATCAGCAGGAATTACTTTAGATCGATTACCTTTATTTGTTTGATCTGTTGTAATTACAGCAGTATTATTACTTTTATCATTGCCTGTTTTAGCTGGAGCTATTACTATGTTATTAACTGATCGAAATTTAAATACTTCATTCTTTGATCCTATTGGAGGAGGAGACCCTATTTTATACCAACATTTATTTTGATTTTTTGGTCACCTGGAAAGTTTAAA。

2.一种根据权利要求1所述用于鉴定背点伊蚊的DNA条形码标准基因的应用，其特征在于：将所述的用于鉴定背点伊蚊的DNA条形码标准基因应用于鉴定待检标本中。

3.根据权利要求2所述的用于鉴定背点伊蚊的DNA条形码标准基因的应用，其特征在于：所述待检标本为非成虫虫态，残缺不全的虫体或成虫。

4.一种利用权利要求1或2所述用于鉴定背点伊蚊的DNA条形码标准基因鉴定背点伊蚊的分子生物学鉴定方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）提取待检标本的基因组DNA：

（2）使用如下的引物进行PCR扩增，得到PCR产物；

上游引物：5’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’；

下游引物：5’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’；

（3）将PCR产物进行电泳分析，如果能扩增出目的条带，则提取该目的条带中的产区进行测序，如果扩增出的产物没有目的条带，则能排除该待检标本为背点伊蚊的可能性；

（4）测序得到的结果与所述的用于鉴定背点伊蚊的DNA条形码标准基因的同源性在98%以上时，则能判断待检标本为背点伊蚊。

5.根据权利要求4所述的鉴定背点伊蚊的分子生物学鉴定方法，其特征在于：步骤（1）中所述的待检标本为非成虫虫态、残缺不全的虫体或成虫。

6.根据权利要求4所述的鉴定背点伊蚊的分子生物学鉴定方法，其特征在于：步骤（2）中所述的PCR的条件为：94℃预变性5min；94℃30s，50℃30s，72℃2min,35个循环；72℃延伸2min；

步骤（2）种所述的PCR的体系为：25μLPCR体系：2.5μL10×buffer(含Mg²⁺)，2μLdNTPs(2.5mmol/L)，上下游引物各1μL，0.5μLDNA聚合酶，1μL模板DNA，去离子水定容至25μL；

步骤（2）中所述的PCR在进行时设置阴性对照和阳性对照：

所述的阳性对照为权利要求1所述的用于鉴定背点伊蚊的DNA条形码标准基因或含有权利要求１所述的用于鉴定背点伊蚊的DNA条形码标准基因的序列；

步骤（3）中所述的目的条带为在分子标记（DNAMarker）700bp条带位置的电泳带，或是与阳性对照同一位置的电泳带。