[发明专利]狐尾兰组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种狐尾兰组织培养方法。

背景技术

狐尾兰(Rhynchostylisgigantea)又名钻喙兰、海南钻喙兰为兰科钻喙兰尾多年生附生草本，其在野生环境下多附生于橡胶树、枫树或榕树上，是我国海南野生名优兰品种之一。狐尾兰叶片肥厚、翠绿，宽带状,外弯，多有数条浅色的纵条纹，茎直立,具数节,不分枝。狐尾兰花序直立或呈下垂状，且花序多而密集；花瓣比萼片小；其唇瓣呈浅3裂或不裂状；距两侧压扁；蕊柱短，蕊柱足较短；花粉块2个，有不同程度的裂隙，呈蜡质状；具有狭长的蕊喙柄以及较小粘盘，花期通常在1-3月。狐尾兰的花色也较为丰富，有红、粉红、白、蓝、橘等颜色。由于其花型独特，花色丰富，花期长，且花期为我国传统春节前后,是极好的新春贺岁花卉，因此受到人们的极度喜欢^[1]。

然而，由于我国海南地区热带森林过量采伐,致使野生狐尾兰的自然生境受到严重破坏,加上人为的过度采集出售,致使野生狐尾兰数量锐减,严重影响了狐尾兰生态群的构成。且由于狐尾兰的种子在自然条件下不易萌发,采用种子繁殖很难获得后代，虽然可以采取分株方法,但是这种方法不仅繁殖系数低,且繁殖速度非常慢,远远不能满足市场的需求^[2]。

目前，通过组织培养的技术来快速繁殖已在很多兰科植物普遍应用，比较常见的如蝴蝶兰、大花蕙兰等。

发明内容

本发明提供一种狐尾兰组织培养方法，为狐尾兰工厂化育苗提供科学依据。

本发明是以如下技术方案实现的：一种狐尾兰组织培养方法，以狐尾兰未成熟种子作外植体,应用组织培养等生物技术对狐尾兰类原球茎体诱导、增殖和催根并获得狐尾兰组织培养所需培养基的最佳条件；具体步骤如下：

1）无菌材料的获得

用去离子水冲洗狐尾兰果实表面,然后在超净工作台上用80%酒精表面消毒果实2min,无菌水冲洗3次,再用无菌滤纸吸干水分,然后用解剖刀切开荚果,取出细小种子,轻轻将种子均匀散落到固体培养基上,每平板接种量为55粒种子；

2）类原球茎体诱导

把狐尾兰的种子分别接种于诱导培养基中,诱导原球茎(类原球茎体)的形成。培养基组成成分如下：VW+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L；

3）培养方式的筛选

将诱导出的类原球茎体接种在1/2MS培养基上，分别采用固体培养和液体转动培养两种方式，4次重复，每个处理接种20个三角瓶；四周后统计类原球茎体的增殖倍数；其增殖倍数=新长出的类原球茎体/接种类原球茎体数；

4）植物生长调节剂浓度的筛选

以1/2MS为基本培养基，添加不同浓度的BA,KT,IBANAA这四种生长调节剂,分别进行单因素试验，每处理4次重复，每个处理接种20个三角瓶；四周后统计类原球茎体的增殖倍数，计算方法同步骤3）；

5）不同添加物对类原球茎体的褐化

以1/2MS为基本培养基，在培养基中分别添加不同浓度的维生素C、活性炭AC和Na₂S₂O₃；分别进行单因素试验，每处理3次重复，每个处理接种20个三角瓶；50天后观察并记录类原球茎体褐化和生长状况。

本发明的有益效果是：本发明通过对不同条件下类原球茎体增殖倍数的研究，来明确培养基中各种成分的作用方式，最终得出如下结论：1）液体培养基有利于类原球茎体短期的快速增殖，长期继代培养及保存类原球茎体时选用固体1/2MS培养基适宜；（2）在培养过程中，施加1mg/L的BA的效果更优，可以增加类原球茎体的数目，又不会引起玻璃化的产生；（3）在培养基中加入1.0g/L维生素C可以有效抑制外植体的褐化。

具体实施方式

实施例1

1）无菌材料的获得

用去离子水冲洗狐尾兰果实表面,然后在超净工作台上用80%酒精表面消毒果实2min,无菌水冲洗3次,再用无菌滤纸吸干水分,然后用解剖刀切开荚果,取出细小种子,轻轻将种子均匀散落到固体培养基上,每平板接种量为55粒种子；

2）类原球茎体诱导

把狐尾兰的种子分别接种于诱导培养基中,诱导原球茎(类原球茎体)的形成。培养基组成成分如下：VW+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L；

3）培养方式的筛选