[发明专利]含乳饮料中γ‑氨基丁酸和16种蛋白水解氨基酸同时检测的专用高精度高效液相色谱方法

说明书

技术领域

本发明属于氨基酸检测技术领域，具体为含乳饮料中γ-氨基丁酸和16种蛋白水解氨基酸同时检测的高效液相色谱方法。

背景技术

γ-氨基丁酸（GABA）是一种天然存在的非蛋白质氨基酸,是哺乳动物中枢神经系统的抑制性传递物质，是脑组织中最重要的神经递质之一。它能够结合抗焦虑的脑受体并使之激活，然后与另外一些物质协同作用，阻止与焦虑相关的信息抵达脑中枢，能够降低神经元活性，舒缓人们的不安、压力、疲倦、忧虑等状况。

2009年卫生部批准GABA为新资源食品，以L-谷氨酸为原料经希氏乳杆菌发酵制成，可应用于饮料及糖果、膨化食品等中。乳品作为人们普遍食用的消费品之一，GABA与牛奶的结合，能够使人们很好地在补充日常营养所需的同时缓解压力、减少不安。

针对γ-氨基丁酸，现行轻工行业标准QB/T 4587-2013 《γ-氨基丁酸》的规范性附录中提供了γ-氨基丁酸含量检测方法；张晖等（2003）采用OPA柱前自动衍生测定了米胚芽中的γ-氨基丁酸；涂云飞等（2012）采用柱前衍生高效液相色谱法测定茶叶中的γ-氨基丁酸；胡雪莲等（2015）采用高效液相色谱法测定了黑莓果汁及黑莓啤酒中的γ-氨基丁酸。针对氨基酸检测，现行国家标准GB/T 5009.124-2003 《食品中氨基酸的测定》，用于测定食品中16种氨基酸，但是采用全自动氨基酸分析仪。

这些方法或是对米胚芽、茶叶、黑莓果汁和啤酒中的γ-氨基丁酸进行检测，或是对食品中16种氨基酸的检测，对含乳饮料中γ-氨基丁酸和16种蛋白水解氨基酸同时检测的快速准确的分析检测方法还鲜见报道。因此，开展含乳饮料中γ-氨基丁酸和16种蛋白水解氨基酸同时检测方法的研究工作，对提高产品品质、加强监督具有重要的意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种含乳饮料中γ-氨基丁酸和16种蛋白水解氨基酸同时检测的专用高精度高效液相色谱方法，具有极高的灵敏度和优越的稳定性。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案如下。

含乳饮料中γ-氨基丁酸和16种蛋白水解氨基酸同时检测的专用高精度高效液相色谱方法，设定样品水解、衍生处理、上柱检测三个操作步骤，然后针对含乳饮料的特性设定上述三操作步骤所使用的处理试剂及试剂用量及处理参数，使得上述三操作步骤的工艺参数相互严密配合，实现对含乳饮料中γ-氨基丁酸和16种蛋白水解氨基酸的一步式高精度检测。

作为本发明的一种优选技术方案，该检测方法包括如下步骤：

A、制备含乳饮料水解样品：取含乳饮料置于水解管中，加入盐酸和苯酚后随即冷冻处理，然后充入惰性气体并拧紧水解管螺盖，再将水解管放入恒温干燥箱进行充分水解，然后将水解液取出过滤，取滤液干燥蒸干，再次用盐酸溶解并精滤到高效液相色谱的进样瓶中；

B、水解样品的自动柱前衍生处理：在室温条件下，吸收步骤A所得样品并与和硼酸缓冲液、邻苯二甲醛混匀，再吸取9-芴基甲基氯甲酸酯混匀，准备上样；

C、高效液相色谱检测γ-氨基丁酸和16种氨基酸的含量：高效液相色谱的分离条件为，色谱柱：通用的C18液相色谱柱；柱温：40℃；流动相A：纯水中加入结晶乙酸钠混匀，调pH调后加入四氢呋喃；流动相B：纯水中加入结晶乙酸钠混匀，调pH后加入乙腈和甲醇混匀；梯度洗脱条件设定如下：