[发明专利]一种头孢噻呋半抗原及其胶体金检测装置及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及一种头孢噻呋半抗原及其胶体金检测装 置及其制备方法。

背景技术

头孢噻呋是一种亲脂弱碱性乙胺嘧啶类抑菌剂，其抗菌谱和磺胺类药物相似，但 抗菌作用较磺胺类药物强，对大肠杆菌、奇异变形杆菌、肺炎杆菌、腐生葡萄球菌、多种革兰 阳性和阴性细菌有效，但对绿脓杆菌感染无效，最低抑菌浓度常低于10mg/L，单用易引起细 菌耐药性，故一般不单独使用，主要与磺胺药组成复方制剂。因此它又被称为磺胺增效剂， 用于扩大抗菌谱，增强抗菌活性。临床上用于治疗尿路感染、肠道感染、呼吸道感染、菌痢、 肠炎、伤寒、脑膜炎、中耳炎、流脑、败血症及软组织感染等。可与长效磺胺药合用于耐药恶 性疟的防治。随着磺胺类药物在兽医临床上不合理的使用，甚至滥用，以至于抗菌增效剂类 药物在动物源性食品中的残留会不可避免地发生。人类长期食用含有头孢噻呋残留的动物 性食品及其制品，将有可能对人类健康产生危害。因此为了加强对动物性食品中这类药物 的监控，建立一种准确、快速、方便的头孢噻呋残留量检测方法很有必要。

目前，国内外检测头孢噻呋的方法主要有高效液相色谱法（HPLC），液相-质谱联用 （LC-MASS）法和酶联免疫吸附（ELISA）法。在食品安全检测中，往往先用ELISA初筛后再对阳 性样本用HPLC或LC-MASS进行确证。上述方法中所用仪器设备安规复杂、成本高、对操作人 员技术要求高且不能立即显示结果，因此不适用于商检、防疫、畜牧生产者对怀疑对象进行 快速的在线检测和监控。

发明内容

针对以上技术问题，本发明公开了一种头孢噻呋半抗原及其胶体金检测装置及其 制备方法，针对现有检测头孢噻呋技术的不足，建立一种检测头孢噻呋残留的快速方法，使 其能更加快速、灵敏、简便地检测头孢噻呋残留，满足了快速检测的需要。

对此，本发明采用的技术方案为：

一种头孢噻呋半抗原，其具有式（1）所示的化学结构式：

式（1）。

上述分子式的化学名为(6R,7R)-7-[2-(2-氨基丙酸噻唑-4-基)-(Z)-2-(甲基亚 胺基)乙酰胺基]-3-[(2-呋喃基羰基)硫甲基]-3-头孢烯-4-羧酸，其分子式为C₂₂H₂₁N₅O₉S₃， MASS[M+H]峰值为596.4，熔点为249度。

作为本发明的进一步改进，所述的头孢噻呋半抗原采用以下步骤制备得到：

步骤S1：将头孢噻呋钠溶解于甲醇中，加入冰乙酸，于20~30℃下搅拌10~120分钟，其 中，所述冰乙酸的摩尔量是头孢噻呋钠摩尔量的1~3倍；再加入水，二氯甲烷萃取，旋干有机 相，得到淡粉红色固体；

步骤S2：取步骤S1中得到的淡粉红色固体溶于DMF（二甲基甲酰胺）中，加入碳酸钾及溴 丙酸，35~45℃下反应2~8小时，采用二氯甲烷萃取过柱提纯得所述头孢噻呋半抗原。

本发明还公开了一种头孢噻呋免疫抗原，采用如上所述的头孢噻呋半抗原制备得 到，将所述头孢噻呋半抗原与DCC（Dicyclohexylcarbodiimide，二环己基碳二亚胺）、NHS （N-羟基琥珀酰亚胺）混合，于4℃下搅拌，离心后取上清液；将人血清蛋白溶于pH值为8.0 的PBS溶液中，加入DMF后搅拌，然后将所述上清液逐渐加入其中，4℃下反应12h，离心后， 取上清液，透析纯化，得到所述头孢噻呋免疫抗原。

作为本发明的进一步改进，所述透析纯化时，在4℃下用生理盐水透析3天，每天更 换3次透析液。

本发明还公开了一种头孢噻呋单克隆抗体，采用如上所述的头孢噻呋免疫抗原与 免疫Balb/c小鼠经细胞融合，筛选得到分泌头孢噻呋单克隆抗体的杂交瘤细胞，用获得的 杂交瘤细胞采用体内诱生腹水法制备得到头孢噻呋单克隆抗体。