[发明专利]一种具有抗癌作用的土圞儿总生物碱，制备方法及应用

说明书

本发明涉及一种土圞儿总生物碱制备方法及其在制备对肿瘤细胞生长具有抑制作用的药物中的用途。本发明提供了一种从土圞儿中提取生物碱的方法，该方法具有简单、易掌握、成本低、收率高的优点。本发明还提供一种采用如前述方法制得的土圞儿总生物碱在治疗癌症中的应用，尤其是治疗肝癌、肺癌、胰腺癌和恶性淋巴瘤中的应用。细胞药效试验表明，采用本发明制得的土圞儿总生物碱对人肺腺癌A549细胞、人肝癌HepG2细胞、人胰腺癌BxPC‑3细胞和人恶性淋巴瘤Raji细胞具有明显的抑制作用。

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及一种土圞儿总生物碱制备方法及其在制备对肿瘤细胞生长具有抑制作用的药物中的用途。

背景技术

土圞儿作为浙江地区常用中药，始载于《救荒本草》，为豆科土圞儿属植物土圞儿Apios fortunei Maxim.的干燥块根，异名地栗子(《救荒本草》)，土子、土蛋(《贵州民间草药》)、丸牛子(江西《草药手册》)，九子羊、黄皮狗卵(《浙江药用植物志》)。主要分布于浙江、江西、福建、台湾、广东、广西、四川、贵州等地。药用部分为干燥块根。味甘，微苦，性平。《贵州民间草药》：“散积，理气，解毒，补脾。”《全国中草药汇编》：“清热解毒，化痰止咳。”《贵州药植调查》：“治蛇咬伤，并治疔癀，去毒”。可用于感冒咳嗽，百日咳，咽喉肿痛，疝气，痈肿，瘰疬。

由于土圞儿为地方药材，到目前为止，对其进行的研究并不多。在已见的报道中，主要对土圞儿的原植物形态、药材性状、显微特征(李水福等.中国民族民间医药杂志，1998，(40)：297)及化学成分(《中华本草》)进行了初步研究。土圞儿用于小儿感冒、百日咳方面的治疗，多出现于民间经验方中。我们对其进行了化学成分的初步研究，结果表明土圞儿中含有生物碱类成分。

生物碱是存在于自然界中的一类含氮有机化合物，大多数有复杂的环状结构，且氮原子多包含在环内，多具有碱性，可与酸成盐，具有显著的生理活性。生物碱的种类繁多，结构复杂，按基本母核的类型可分为吡啶类生物碱，莨菪烷类生物碱，异喹啉类生物碱，吲哚类生物碱和有机胺类生物碱。生物碱作为中草药中的一类活性成分之一，在现代临床上发挥着极其重要的意义，例如黄连中的主要成分小檗碱，有明显的抗菌、抗病毒作用；麻黄中的麻黄碱有收缩血管、兴奋中枢神经作用，伪麻黄碱有升压、利尿作用；洋金花中的莨菪碱及其 外消旋体阿托品有解痉镇痛、解有机磷中毒和散瞳作用。土圞儿作为浙江地区的常用中药，对其生物碱类成分的提取和应用有待进一步深入研究，目前在国内外尚未发现对土圞儿中生物碱的提取及其应用有过报道。

我们对土圞儿提取物进行了抗肿瘤预实验，结果表明土圞儿提取物对人肝癌HepG2细胞有明显的抑制作用，提示土圞儿具有一定抗癌作用。进一步对土圞儿中的生物碱进行了体外抗肿瘤实验，结果表明土圞儿总生物碱对人肝癌HepG2细胞有明显的抑制作用。

总生物碱的提取常用溶剂法提取，包括水和酸水、醇类溶剂和亲脂性有机溶剂提取法，水溶性生物碱通常在提取脂溶性生物碱后的碱液中用沉淀法或溶剂法进行提取。按具体操作可分为浸渍法、渗流法、煎煮法、热回流法和连续回流法(索氏提取法)。

总生物碱的纯化方法有有机溶剂萃取法、树脂法等。对于水或酸水提取液，用碱液将其碱化，使其中的生物碱盐转变成为游离生物碱，再用有机溶剂把游离的生物碱萃取出来。对于有机溶剂萃取液，首先减压回收溶剂，用稀酸水溶解，将不溶性杂质除去，再将溶液碱化，使用有机溶剂进行萃取。溶剂萃取技术是提取分离的经典技术，其优点是简单有效，容易放大。树脂法包括离子交换树脂法和大孔吸附树脂法，生物碱盐阳离子交换到树脂上从而与非碱性的化合物分离，再用碱水洗脱得到生物碱。大孔吸附树脂的结构与离子交换树脂类似，它的吸附作用主要依靠自身和被吸附介质之间的范德华力，通过巨大的比表面积进行物理吸附的，具有比表面积大、吸附容量大、吸附速度快、选择性好、再生处理方便等特点，特别适合于从水溶液中分离低极性或非极性的化合物。

发明内容