[发明专利]一种中药组合物的指纹图谱的建立方法

权利要求书

1.一种中药组合物的指纹图谱建立方法，所述中药组合物以狗脊、金樱子、鸡血藤、千斤拔、黑老虎、牛大力、蒸女贞子、蒸桑寄生、盐水制菟丝子、制延胡索、两面针、制乳香和制没药为原料，通过本领域常用的方法，与药学上可以接受的辅料，制备成临床上可以接受的制剂；所述指纹图谱建立方法包括采用高效液相色谱法检测所述中药组合物中各类化合物的保留时间，其中所述高效液相色谱的条件如下：

色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相；

流动相由乙腈和体积百分浓度0.1％的磷酸水溶液组成，0～170min乙腈在流动相中的体积百分比由5％匀速地递增至90％；流速1ml/min；

柱温为30℃；

紫外检测波长为254nm。

2.根据权利要求1所述的指纹图谱建立方法，其特征在于，还包括通过以下方法制备供试品溶液：取所述中药组合物5g，粉碎，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，超声30min，放冷至室温，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.根据权利要求1所述的指纹图谱建立方法，其特征在于，还包括通过如下方法制备对照品溶液：分别精密称取原儿茶酸、原儿茶醛、特女贞苷、日本南五味子素甲、乙酰日本南五味子素甲、(2′S)-南五味子木质素J对照品，混合，加甲醇制成浓度为原儿茶酸90μg/ml、原儿茶醛30μg/ml、特女贞苷50μg/ml、日本南五味子素甲20μg/ml、乙酰日本南五味子素甲20μg/ml、(2′S)-南五味子木质素J40μg/ml的混合对照品溶液，即得。

4.根据权利要求1所述的指纹图谱建立方法，其特征在于，具体的操作步骤包括：

1)对照品溶液的制备：分别精密称取原儿茶酸、原儿茶醛、特女贞苷、日本南五味子素甲、乙酰日本南五味子素甲、(2′S)-南五味子木质素J对照品，混合，加甲醇制成浓度为原儿茶酸90μg/ml、原儿茶醛30μg/ml、特女贞苷50μg/ml、日本南五味子素甲20μg/ml、乙酰日本南五味子素甲20μg/ml、(2′S)-南五味子木质素J40μg/ml的溶液，即得；

2)供试品溶液的制备：取所述中药组合物5g，粉碎，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，超声30min，放冷至室温，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

3)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，根据以下色谱条件进行测定，记录170min内的色谱图，得到指纹图谱：

色谱柱：Waters Atlantis色谱柱，250×4.6mm，固定相平均粒径5μm；

流动相：乙腈-体积百分浓度0.1％的磷酸水溶液，0～170min乙腈在流动相中的体积百分比由5％匀速地递增至90％；

流速：1.0mL/min；

柱温：30℃；

紫外检测波长：254nm。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的指纹图谱建立方法，其特征在于，建立的指纹图谱包括原儿茶酸吸收峰，并以原儿茶酸吸收峰为参照。

6.根据权利要求5所述的指纹图谱建立方法，其特征在于，建立的指纹图谱以原儿茶酸吸收峰为参照，还包括原儿茶醛吸收峰、特女贞苷吸收峰、日本南五味子素甲吸收峰、乙酰日本南五味子素甲吸收峰、或(2′S)-南五味子木质素J吸收峰中的一个或多个，相对保留时间分别为：

原儿茶醛吸收峰：1.348±0.13％，特女贞苷吸收峰：2.870±0.05％，日本南五味子素甲吸收峰：7.423±0.02％，乙酰日本南五味子素甲吸收峰：8.185±0.02％，(2′S)-南五味子木质素J吸收峰：10.145±0.02％。

7.根据权利要求1所述的指纹图谱建立方法，其特征在于，所述的中药组合物的原料由如下重量份的药材组成：

狗脊600重量份，金樱子192重量份，鸡血藤360重量份，千斤拔144重量份，黑老虎360重量份，牛大力240重量份，蒸女贞子30重量份，蒸桑寄生180重量份，盐水制菟丝子30重量份，制延胡索26重量份，两面针26重量份，制乳香12重量份，制没药20重量份。