[发明专利]一种联苯菊酯半抗原及其快速检验装置及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及一种联苯菊酯半抗原及其快速检验装置及其制备方法。

背景技术

联苯菊酯(Bifenthrin,BF)，是一种人工合成的拟除虫菊酯类农药。由于其具有杀虫谱广，击倒作用快，持续时间长，强大的胃毒和触杀作用而广泛用于棉花、茶树、果树、蔬菜等农业害虫及白蚁、螨虫等卫生害虫的防治。联苯菊酯化学性质稳定，进入环境后不易被分解，其广泛使用容易引起较大残留。虽然联苯菊酯在人体内代谢快，不具有积累的危险。但研究表明，它具有神经毒害作用，通过影响动物的神经系统和钠离子通道活性，干扰神经系统的正常功能。因而，长期低剂量接触联苯菊酯将对健康产生严重影响。世界卫生组织已将联苯菊酯归类为第2类农药，即中等毒性/中度危害的类别。世界上多个国家包括中国、美国、加拿大等先后对农产品中联苯菊酯残留做了限量规定，欧盟规定食品中联苯菊酯限量为5.0mg/kg。发展快速检测联苯菊酯残留的方法对保证食品安全，确保我国农产品顺利出口具有重要意义。

目前对联苯菊酯的残留分析主要采用气相色谱法、气相色谱-质谱联用法、气相色谱-质谱联用-负化学离子源法、高效液相色谱法、高效薄层色谱法与酶联免疫分析方法。仪器检测方法具有结果可靠准确、检测限低等优点。然而，仪器检测的方法，样品前处理繁琐、时间长，需要经过专业培训、有丰富经验的人员操作，检测费用高，不适合批量样品的快速检测与现场检测。与仪器检测相比，酶联免疫分析方法可同时实现对多个样品的定性、定量检测，检测成本降低，然而，酶联免疫方法依然需要有一定经验的专业人员操作，实验结果受外界影响及样品基质影响较大。

发明内容

针对以上技术问题，本发明公开了一种联苯菊酯半抗原及其快速检验装置及其制备方法，针对现有检测联苯菊酯技术的不足，建立一种检测联苯菊酯残留的快速方法，使其能更加快速、灵敏、简便地检测联苯菊酯残留，满足了联苯菊酯残留快速检测的需要，给食品安全提供重要手段。

对此，本发明采用的技术方案为：

一种联苯菊酯半抗原，其具有式(1)所示的化学结构式：

上述化学结构式的化学名为3-(2-氯-3,3,3-三氟丙烯)-2,2-二甲基-环丙烷酸4’-(3-羧基-丙酰基氨基)-联苯-3-甲基酯；其分子量为521，其MS母离子峰为522.1；颜色：淡黄色，其熔点为115-122℃。

作为本发明的进一步改进，所述联苯菊酯半抗原采用以下步骤制备得到：

步骤S1：将功夫酸与氯化亚砜反应，回流蒸干后溶解到氯仿中，冰浴下加入反应物2对硝基联苯醇，20～30℃反应3～6h，蒸干，过柱纯化后得到中间产物2对硝基联苯醇功夫酸酯；

步骤S2：称取上述中间产物2对硝基联苯醇功夫酸酯，溶于无水乙醇中，加入氯化亚锡，70～80℃回流1～2h，蒸干溶剂后纯化，得到黄色油状物，将所述黄色油状物用无水吡啶溶解后，加入丁二酸酐，反应3～6h，过硅胶柱纯化得到所述联苯菊酯半抗原。

进一步优选的，采用如下反应路线制备联苯菊酯半抗原：

优选的，制备所述联苯菊酯半抗原的步骤为：

(1)称取1.2g功夫酸，如式(2)中的反应物1，向其中加入8ml氯化亚砜，回流3h后，蒸干后得到式(2)中的中间产物1，用氯仿溶解；冰浴下滴加到溶有1g反应物2的氯仿吡啶溶液中，室温反应4h，蒸干，过柱纯化后得到淡黄色结晶物，如式(2)中的中间产物2。

(2)称取1.2g上述中间产物2，溶于无水乙醇中，加入1.0g氯化亚锡，75℃回流1.5h，蒸干溶剂后过硅胶柱纯化，得到黄色油状物，即式(2)中的中间产物3，用无水吡啶溶解后，加入0.5g丁二酸酐，即式(2)中的反应物3，反应4h，过硅胶柱纯化得到联苯菊酯半抗原，即式(2)中的半抗原。

本发明还公开了一种联苯菊酯抗原，采用如上所述的联苯菊酯半抗原制备得到，利用碳二亚胺法，将所述联苯菊酯半抗原与载体蛋白偶联得到联苯菊酯抗原。

进一步优选的，所述联苯菊酯抗原采用以下步骤制备：将所述联苯菊酯半抗原与BSA(牛血清蛋白)溶于pH值为8.5～9.5的碳酸缓冲溶液中，并加入碳二亚胺，搅拌12～24h，透析纯化，得到联苯菊酯抗原。

本发明还公开了一种联苯菊酯单克隆抗体，采用如上所述的联苯菊酯抗原与免疫Balb/c小鼠经细胞融合，筛选得到联苯菊酯单克隆抗体细胞株，用获得的联苯菊酯单克隆抗体细胞株诱导小鼠产生腹水，纯化后获得联苯菊酯单克隆抗体。