[发明专利]一种多肽及其作为细菌或哺乳细胞转染载体的应用

说明书

本发明涉及一种多肽及其作为细菌或哺乳细胞转染载体的应用。所涉及的多肽的结构如式(1)所示。本发明的转染体系，能够转染多种类型小核酸分子，分枝状肽与小核酸分子以非共价方式结合形成纳米粒，纳米粒制备简单；本发明的多肽不仅适用于细菌的转染，同时也适用于真核细胞的转染。i＝3,6或10；X_P3为‑R‑K‑R,Y_P3为‑R‑W‑L‑A‑W‑L；X_P6为‑R‑R‑K‑R,Y_P6为‑W‑L‑A‑W‑L‑Ac；X_P10为‑R‑R‑H‑R,Y_P3为‑W‑L‑A‑W‑L‑Ac。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种多肽及其作为细菌或哺乳细胞转染载体的应用。

背景技术

近些年来，小核酸分子药物得到越来越多的关注与研究。不仅在哺乳细胞上得到了广泛的研究与应用，也成为抗菌药物研究新的突破点。小核酸分子是通过碱基互补配对原理，根据细胞内基因组学相关信息，以细胞内增殖、致病等相关基因为靶点，干扰基因的解旋、复制、转录、mRNA的剪接加工至输出和翻译等各个环节，从阻断相关基因表达入手，进而达到治疗作用。然而，一个未经修饰的由10个单体组成的寡核苷酸分子量一般在2-3kDa，各种化学结构修饰将进一步增加其大小，核酸分子量增大，细胞摄入率降低，从而不能更好地进入细胞而发挥治疗作用。此外，在细菌中，由于细菌的细胞壁具有不同寻常的结构，这种有效的屏障会使外来分子难以透过，包括小分子化合物和小核酸分子，特别是脂多糖组成的革兰阴性菌的外膜也是阻碍分子进入细菌的一个主要障碍。

多种反义基因靶向核酸药物递药系统已成功地应用于真核细胞的基因治疗，然而由于细菌细胞和真核细胞尺寸、结构组成不同，这些适用于真核细胞的基因递药系统并不完全合适。研究表明，除了脂质体递药系统之外，透膜肽(CPPs)也可用于抗菌反义寡核苷酸分子的运载工具，但相关研究却很少，目前仅发现HIV-TAT，pVEC和(RXR)₄三种透膜肽通过与反义寡核苷酸共价结合，可实现反义抗菌分子的递送。但这种共价结合导致合成成本较高，载药量低及工业化生产困难等问题，极大地限制了小核酸药物抗菌的发展。

发明内容

针对现有技术的缺陷或不足，本发明的目的之一是提供一种多肽。该多肽的结构为：

i＝3,6或10；

X_P3为-R-K-R,Y_P3为-R-W-L-A-W-L；

X_P6为-R-R-K-R,Y_P6为-W-L-A-W-L-Ac；

X_P10为-R-R-H-R,Y_P3为-W-L-A-W-L-Ac。

本发明同时提供了多肽-核酸分子复合物的制备方法：方法包括多肽与脂质混合后加入核酸分子制备多肽-核酸分子复合物；所述脂质为DOTAP、DOPC、DODAG、DOPE、DMTAP、DPPC、RPR 209120、Chol、Cardiolipin、DODMA、DSPC、DGG、DLinDMA、DLin-KC2-DMA、PEG2000-C-DMA、AtuFECT01、DphyPE、DSGLA或DSPE。

进一步，本发明的制备方法中盐离子浓度小于0.2mM。

进一步，本发明的制备方法中多肽与核酸中N与P的摩尔比为8：1，脂质的质量与核酸质量相等。

本发明的核酸分子为asRNA、siRNA、miRNA或质粒DNA。

本发明还提供了上述多肽作为细菌转染载体的应用。

本发明同时还提供了上述多肽作为哺乳细胞转染载体的应用。