[发明专利]一种日本枫蝴蝶的组培快繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物组培育苗技术领域，具体涉及一种日本枫蝴蝶的组培快繁方法。

背景技术

日本枫蝴蝶，其拉丁名为Acer palmatum‘Butterfly’，是一个非常特别的小型花斑叶品种，叶子形状多变，几乎很难找到两片一样的叶子，叶子以乳白色或白色为主要颜色。春天新叶的浅粉色区域大于白色或乳白色区域，秋天白色部分变成洋红色，使整片叶子呈现出新的景象。其植株健壮，生长旺盛，是观叶植物的佳品。该品种数量少，虽然目前没有广泛栽植，但它将会成为一个很受欢迎的园林景观树种，极具观赏价值与经济价值。目前主要通过播种和嫁接繁殖，但出芽率和成活率都不是很高，繁殖系数低，繁殖周期长，场地要求大，人工成本较高，远不能满足国内对种苗的需求。

因此，如何提高其生产效率，缩短培育时间，降低人工成本，保持优良树种的遗传稳定性，提高其繁殖系数成为目前亟待解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本申请提供一种日本枫蝴蝶的组培快繁方法，所用培养基配方简单，组培流程简便，培养时间短，增殖频率高，幼苗整齐，便于后期统一的移栽和种植管理，降低了人工成本，能保证所长出的幼苗植株在形状上的一致性，易于操作，可进行产业化生产。

为解决以上技术问题，本发明提供的技术方案是一种日本枫蝴蝶的组培快繁方法，包括以下步骤：

(1)外植体选取及灭菌：切取日本枫蝴蝶带芽茎段，采用酒精和升汞灭菌处理后，得外植体；

(2)启动培养：将步骤(1)所得外植体接种到启动培养基中培养3—5周，腋芽生成，所述启动培养基的组成为：White基本培养基，补充0.05—0.25mg/L NAA、0.01—0.08mg/L 6-BA、10—50g/L蔗糖、1—10g/L琼脂；

(3)增殖培养：切取步骤(2)所得腋芽，接种到增殖培养基中培养6—8周，丛生芽生成，所述增殖培养基的组成为：White基本培养基，补充0.05—0.25mg/L 2，4-D、0.05—0.25mg/L NAA、0.05—0.25mg/L TDZ、0.1—1.0mg/L 6-BA；

(4)生根培养：将步骤(3)所得丛生芽分离成单芽，接种到生根培养基中培养4—6周即得日本枫蝴蝶无菌苗，所述生根培养基的组成为：1/2White基本培养基，补充0.01—0.08mg/L NAA、0.01—0.02mg/L IBA。

优选的，所述外植体选取及灭菌的具体操作为：选取日本枫蝴蝶幼嫩枝条，去掉叶片，切割成长度为2—3cm的带芽茎段，在无菌操作台上，用75％的酒精处理6—10s，再用0.1％的升汞处理6—10min，无菌水冲洗4—6次，晾干即可。

优选的，所述启动培养基的组成为：White基本培养基，补充0.05—0.15mg/L NAA、0.03—0.06mg/L 6-BA、20—40g/L蔗糖、3—8g/L琼脂。

更为优选的，所述启动培养基的组成为：White基本培养基，补充0.1mg/L NAA、0.05mg/L 6-BA、30g/L蔗糖、5g/L琼脂。

优选的，所述增殖培养基的组成为：White基本培养基，补充0.05—0.15mg/L 2，4-D、0.05—0.15mg/L NAA、0.05—0.15mg/L TDZ、0.5—0.9mg/L 6-BA。

更为优选的，所述增殖培养基的组成为：White基本培养基，补充0.1mg/L 2，4-D、0.1mg/L NAA、0.1mg/L TDZ、0.8mg/L 6-BA。

优选的，所述生根培养基的组成为：1/2White基本培养基，补充0.03—0.07mg/L NAA、0.01—0.015mg/L IBA。

更为优选的，所述生根培养基的组成为：1/2White基本培养基，补充0.05mg/L NAA、0.01mg/L IBA。

优选的，所述启动培养基的pH值为6.3—6.7。

优选的，所述启动培养、增殖培养、生根培养步骤中，培养温度为24—28℃，光照强度为2000—3000Lx，光照时间为14—18h/d。

本申请所述White基本培养基无机盐含量较低，但提高了硫酸镁的浓度，添加了硼素，能够保证组织生长所需的矿质营养，还能加速愈伤组织的生长，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，较多的用于植物的生根。

所述1/2White基本培养基为：上述White基本培养基配方大量母液减半，更少量的无机盐浓度，更有利于植物的生根。