[发明专利]一种增强hUCMSCs增殖能力的方法及其应用有效
| 申请号： | 201511020978.5 | 申请日： | 2015-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN105463019B | 公开（公告）日： | 2019-07-26 |
| 发明（设计）人： | 张燕;徐辰;刘厚奇;王越;严冰浩;张浩;顾道兰 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第二军医大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 赵青 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 增强 hucmscs 增殖 能力 方法 及其 应用 | ||
1.snoRA7A在制备hUCMSCs体外培养试剂中的应用；所述的试剂在体外培养条件下增强hUCMSCs的增殖能力；所述的snoRA7A的序列如SEQ ID NO:1所示。
2.根据权利要求1所述的snoRA7A在制备hUCMSCs体外培养试剂中的应用，其特征在于，所述的试剂使hUCMSCs在体外培养条件下，随着传代次数增加，减缓hUCMSCs增殖能力的降低。
3.一种在体外培养条件下增强hUCMSCs增殖能力的方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、构建snoRA7A的重组质粒；所述的snoRA7A的序列如SEQ ID NO:1所示；
B、用步骤A获得的重组质粒转染hUCMSCs，获得snoRA7A高表达的hUCMSCs。
4.根据权利要求3所述的在体外培养条件下增强hUCMSCs增殖能力的方法，其特征在于，所述的步骤A构建的重组质粒为pLKD-CMV -G&PR-U6-shRNA-snoRA7A真核表达载体。
5.根据权利要求4所述的在体外培养条件下增强hUCMSCs增殖能力的方法，其特征在于，所述的步骤A为：首先根据snoRA7A的基因序列，设计引物，以hUCMSCs的总DNA为模板，通过RT-PCR调取目的片段，再构建重组pLKD-CMV -G&PR-U6-shRNA-snoRA7A真核表达载体。
6.根据权利要求3所述的在体外培养条件下增强hUCMSCs增殖能力的方法，其特征在于，所述的步骤B中转染的步骤为：按fugene6：质粒=4:3的微升/微克比例对生长至60-70%融合的细胞进行转染，24小时后更换新的培养基。
7.一种snoRA7A高表达的hUCMSCs，其特征在于，所述的snoRA7A高表达的hUCMSCs采用权利要求3-6任一所述的方法制备得到。
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- 一种增强hUCMSCs增殖能力的方法及其应用
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