[发明专利]一种蛋白芯片

说明书

本发明公开了一种新型蛋白芯片，所述新型蛋白芯片的基质材料采用以免疫微量测定板为代表的具孔的玻璃片、具孔的高分子聚合物板、玻璃球或高分子聚合物球代替传统蛋白芯片的基质材料NC膜。普通免疫分析仪通过检测免疫反应所产生的颜色或光强代替传统蛋白芯片的判读仪。新型蛋白芯片配合免疫软件能够在溶液中联合定性、定量检测多种免疫配体。广谱肿瘤新型蛋白芯片是利用多个肿瘤标志物联合定性、定量检测癌症的仪器。新型广谱肿瘤蛋白芯片能有效排除假阳性和假阴性，提高检测的准确度，并且降低芯片制作成本。

技术领域

本发明涉及分子生物学、生物医学、临床免疫分析技术领域，尤其涉及一种新型蛋白芯片。

背景技术

肿瘤是一种常见病和多发病，发病率居第二位。据世界卫生组织 1997年报告称全球肿瘤患者每年死亡人数高达660万，到2020年全球的肿瘤患者将达到1500万。各种恶性肿瘤严重地威胁着人类的身体健康。在肿瘤发病的早期往往没有自觉症状，一旦发觉自觉症状时已到无法治疗的中晚期。在肿瘤发病机理和治疗问题尚未彻底解决的今天，要降低肿瘤患者死亡率必须开展基层肿瘤普查工作，做到早发现早治疗。

尽管研究人员已经发现了多种肿瘤相关抗原，例如CEA(癌胚抗原)、AFP(甲胎蛋白)、CA15－3、CA19－9、CA50、CA125、PSA等等。由于免疫分析具有高度的特异性、专一性，所以利用某种肿瘤相关抗原做成的试剂盒只能检测其对应的一类肿瘤。如果要检查体内是否存在常见的某些肿瘤必须作多项检查，被检查者需支付多个项目检查费用。

1987年Geraghty等发现并克隆了HLA-G。HLA-G是人类白细胞抗原(HLA)I组中非典型的组织相容性抗原，在恶性肿瘤患者的血清中出现，在正常人的血清中不存在HLA-G。HLA-G最初发现于胎盘绒毛细胞滋养层。初期有关HLA-G的研究集中于胎儿同母亲之间的免疫耐受作用。由于胎盘分泌HLA-G使母体产生免疫耐受，从而使胎儿避免了母体的排斥作用。近20年，HLA-G已成为重要的免疫分子，在免疫、生殖、肿瘤、器官移植等方面发挥着重要作用。免疫组化检测结果证实在喉癌、食道癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫癌等多种恶性肿瘤组织中都能表达HLA-G。

大量的实验证明，HLA-G是一个具有高度肿瘤特异性的肿瘤标志物，在恶性肿瘤的表达具有普遍性。在肿瘤发生和发展过程中其水平在肿瘤组织、血液及其它体液中增高。从理论上讲检测HLA-G能广泛用于诊断各种常见的恶性肿瘤，探明受检者体内是否存在常见的任何恶性肿瘤。

但是通过临床检测证实，中晚期肿瘤患者血清中HLA-G含量并不是随肿瘤细胞的增多而含量随之升高，在某种情况下会降到很低水平，以致用检测HLA-G的技术检测不到，产生假阴性结果。这给临床应用 HLA-G诊断癌症带来严重困难。

此外我们还了解到某些化合物还会产生干扰作用，使检测结果产生假阳性。检测癌症产生假阳性是绝对要不得的。

因此为了发挥HLA-G检测肿瘤的广谱性，防止产生假阳性和假阴性结果，我们发明了多肿瘤标志物联合检测的新型广谱蛋白芯片技术。

另外,当代分子生物学也需要高通量定地对溶液中某些种类的蛋白或核酸进行定性或定量分析,同样需求性能练好的新型蛋白芯片分析技术。

目前传统蛋白芯片法是从基因芯片法发展起来的。蛋白芯片法参照基因芯片制作方法制备而成。在一个狭小的硝酸纤维膜(即NC膜) 上用特殊的点样机喷上十几个乃至几十个蛋白点进行免疫分析。由于蛋白的化学性质与DNA不同，多种蛋白在一个狭小的NC膜上产生了空间相互作用，使蛋白芯片产生了很严重的假阳性和假阴性结果。为了解决上述问题，发挥蛋白芯片的高通量检测的性能，必须改进蛋白芯片的制作模式。为此我们研发出新型蛋白芯片新技术。利用新型蛋白芯片检测各种蛋白及肿瘤标志物，收到了良好的检测效果，提高了检出率和准确度，降低了出现假阳性和假阴性的结果，并且显著降低了制作成本。新型肿瘤蛋白芯片成为高通量定性或定量检测蛋白、核酸及肿瘤标志物的良好方法。

发明内容