[发明专利]一种抗草甘膦转基因大豆及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种培育转基因大豆的方法，为将外源DNA片段插入目的大豆基因组第19号染色体的第50,543,767-50,543,792位间，替换掉第19号染色体的第50,543,767-50,543,792位间24bp的碱基序列，得到转基因大豆；

所述转基因大豆的草甘膦抗性高于所述目的大豆；

所述外源DNA片段为含有5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶基因和N-乙酰转移酶基因的DNA分子。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶基因为G2-aroA；

所述N-乙酰转移酶基因为GAT；

所述外源DNA片段为序列表中序列10或序列1自5’末端第6217-10855位核苷酸。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述外源DNA片段在所述转基因大豆的上游侧翼片段为所述目的大豆基因组第19号染色体的自第50,543,767位核苷酸起向其上游方向延伸得到的长度为0至5Kb的任意一个DNA片段；

所述外源DNA片段在所述转基因大豆的下游侧翼片段为所述目的大豆基因组第19号染色体的自第50,543,792位核苷酸起向其下游方向延伸得到的长度为0至5Kb的任意一个DNA片段。

4.根据权利要求3所述方法，其特征在于：

所述上游侧翼片段为序列表中序列8所示的核苷酸；

所述下游侧翼片段为序列表中序列9所示的核苷酸。

5.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于：所述外源DNA片段通过含有所述外源DNA片段的重组载体导入所述目的大豆；

所述重组载体的核苷酸序列具体为序列表中序列1；

所述目的大豆为大豆品种Jack。

6.用于检测或辅助检测植物样品是否来源于权利要求1-5任一所述方法制备的转基因大豆或其后代或用于检测或辅助检测制品是否含有权利要求1-5任一所述方法制备的转基因大豆或其后代的方法，包括如下步骤：检测所述植物样品或制品的基因组DNA中是否含有DNA片段A，

所述DNA片段A为如下1)或2)：

1)由权利要求3中的所述外源DNA片段在所述转基因大豆的上游侧翼片段、权利要求3中的所述外源DNA片段和权利要求3中的所述外源DNA片段在所述转基因大豆的下游侧翼片段组成；

2)与1)所示的DNA片段A同源性大于95％的DNA片段；

若含有所述DNA片段A，则所述植物样品或制品为或候选为所述转基因大豆或其后代；

若不含有所述DNA片段A，则所述植物样品或制品不为或候选不为所述转基因大豆或其后代。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：

所述方法为如下1)或2)或3)：

1)直接测序植物样品或其制品的基因组DNA，判断所述测序植物样品或制品中是否含有所述DNA片段A；

2)用引物对1或引物对2进行PCR扩增，若有目的扩增产物，则所述植物样品或制品含有所述DNA片段A；

所述引物对1为能够扩增由所述外源DNA片段5’端和紧邻其的所述上游侧翼序列部分或全部片段组成的DNA分子甲的引物对；其对应的目的扩增产物为所述DNA分子甲；

所述引物对2为能够扩增含有所述外源DNA片段3’端和紧邻其的所述下游侧翼序列的部分或全部组成的DNA分子乙的引物对；其对应的目的扩增产物为所述DNA分子乙；

3)用能特异结合所述DNA分子甲或其DNA分子乙的探针对待测植物样品或制品DNA进行Southern杂交，若能杂交得到杂交片段，则所述植物样品或其制品来源于所述转基因大豆或其后代。