[发明专利]一种FAP纳米抗体Nb62

说明书

本发明公开了针对于FAP多肽分子抗原表位的一种FAP纳米抗体，同时还公布了编码该FAP纳米抗体的基因序列以及能够表达该FAP纳米抗体的表达载体和宿主细胞，并且公开了该FAP纳米抗体的用途。通过本发明公开的FAP纳米抗体、基因序列及宿主细胞等，可以在大肠杆菌内高效表达出FAP纳米抗体，其与FAP免疫反应特异性好、亲和力高，可应用于制备FAP检测试剂或抗肿瘤药物等。

技术领域

本发明属于生物医学或生物制药技术领域，更具体地说，涉及一种针对于FAP多肽分子抗原表位分子的纳米抗体(Nb62)、其编码序列及用途。

背景技术

成纤维细胞激活蛋白(fibroblast activation protein，FAP)是肿瘤相关成纤维细胞特异性表达的一种表面抗原，具有二肽基肽酶和胶原酶活性，它基因组稳定，具有促进肿瘤细胞生长，侵袭及免疫抑制的作用。FAP由761个氨基酸组成，在不同哺乳动物细胞中的糖基化水平不同，单体相对分子质量有8.8×10⁴、9.5×10⁴、9.7×10⁴等多种报道，二聚体相对分子质量为1.7×10⁵。FAP的结构分为胞浆区、跨膜区和胞外区三部分，其中胞浆区是由开头6个氨基酸组成的短肽链，跨膜区是由19个氨基酸组成，起到固定作用的疏水跨膜片段，然而FAP分子中氨基酸序列20～761的绝大部分都暴露在细胞外的微环境中，这一部分就是胞外区，是关键的酶催化区。FAP同时具有二肽基肽酶活性和胶原酶活性，能够降解基质中的二肽和Ⅰ型胶原。FAP与属于二肽基肽酶家族的DPPIV(dipeptidyl peptidase IV/CD26)具有50％的同源性，均具有肽链外切酶活性，常形成复合物。因此，推测FAP可通过调节肿瘤基质中某些肽类生长因子，修饰活性肽并改变其功能，从而促进肿瘤的发生发展。

在恶性肿瘤中，FAP阳性的成纤维细胞仅占肿瘤细胞总数的2％，但当其被去除后，癌细胞及基质细胞都会发生迅速的坏死。由此可以看出，FAP对恶性肿瘤的发生和发展具有非常重要的作用，而在肿瘤治疗方面则具有广阔的应用前景。靶向肿瘤微环境，尤其是靶向FAP的治疗策略在肿瘤治疗中扮演着非常重要的角色。在肿瘤发生、发展过程中，肿瘤细胞不仅被动地逃避免疫系统的攻击，同时也主动地抑制其生长环境中的免疫细胞的正常功能，它与其所处的微环境相互作用，形成抑制性肿瘤微环境并促进肿瘤的恶性进展，这些因素的存在为探讨肿瘤发生机制及开辟新的肿瘤免疫治疗方案提供了思路。

目前已经发展了几种FAP特异性单克隆抗体，并开始在临床诊断和治疗中得到应用，其对肿瘤组织的亲和力得到了提高。但是这种传统方法存在抗体稳定性差、灵敏度低、生产成本高等缺点。

纳米抗体技术，是生物医学科学家在传统抗体的基础上，运用分子生物学技术结合纳米粒子科学的概念进行的抗体工程革命，从而研发出的最新和最小的抗体分子，最初由比利时科学家莱曼德.哈马斯在骆驼血液中发现。普通的抗体蛋白由两条重链和两条轻链组成，而从骆驼血液中发现的新型抗体只有两条重链，没有轻链，这些“重链抗体”能像正常抗体一样与抗原等靶标紧紧结合，但不像单链抗体那样相互黏连聚集成块。以该“重链抗体”为基础的纳米抗体不仅分子量只是普通抗体的1/10，而且化学性质也更加灵活，稳定性好，可溶性高，表达容易且容易获得，并容易偶联其他分子。但是，现有技术中并没有针对FAP研发出适用的纳米抗体。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术中缺乏针对FAP表位的纳米抗体的缺陷，提供一种FAP纳米抗体，同时提供编码该FAP纳米抗体的DNA分子以及该纳米抗体的用途等。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：本发明的第一方面，提供了一种FAP纳米抗体，该FAP纳米抗体为针对FAP表位的纳米抗体，包括两条如SEQ ID NO：9所示氨基酸序列的VHH链。本发明中该FAP纳米抗体可以简称为Nb62。