[发明专利]检测FIX基因全外显子的方法和引物

权利要求书

1.检测FIX基因全外显子的引物，其特征在于，包括：扩增覆盖检测FIX基因全外显子的正、反向引物；其碱基序列为：

FIX-1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGTACAACTAATCGACCTTACCACTT

FIX-1-R：AACAGCTATGACCATGCGTGCTGGCTGTTAGACTCT

FIX-2+3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCCTAAAGAGAAATTGGCTTTCAG

FIX-2+3-R：AACAGCTATGACCATGGAATTGCTTACCAACATACTGCTTC

FIX-4F：TGTAAAACGACGGCCAGTTGGCTTCCAGGTCAGTAGTT

FIX-4R：AACAGCTATGACCATGAGGTGAGTCGGAACATCATTATTAC

FIX-5F：TGTAAAACGACGGCCAGTCACTCTTATTTCAAGGCTCCAA

FIX-5R：AACAGCTATGACCATGAAGGAAGCAGATTCAAGTAGGA

FIX-6F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCTTGAGACTCTATTCACTGATTAG

FIX-6R：AACAGCTATGACCATGCATCCCAATAGGTCTGTCTAGTA

FIX-7F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCCAGCACCTAGAAGCCAATA

FIX-7R：AACAGCTATGACCATGCCCTTCTGCCTTTAGCCCAAT

FIX-8F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGTGAACATAATATTGAGGAGACAG

FIX-8R：AACAGCTATGACCATGTTAGTTAGTGAGAGGCCCTGTTAA。

2.如权利要求1至2之一所述的引物，其特征在于，所述7对正、反向引物的使用浓度比为：FIX-1F:FIX-1R＝1:1；FIX-2+3F:FIX-2+3R＝1:1；FIX-4F:FIX-4R＝1:1；FIX-5F:FIX-5R＝1:1；FIX-6F:FIX-6R＝1:1；FIX-7F:FIX-7R＝1:1；FIX-8F:FIX-8R＝1:1。

3.一种检测检测FIX基因全外显子序列的方法，其包括如下步骤：

(1)提取样品DNA；

(2)利用7对扩增引物FIX-1F与FIX-1R；FIX-2+3F与FIX-2+3R；FIX-4F与FIX-4R；FIX-5F与FIX-5R；FIX-6F与FIX-6R；FIX-7F与FIX-7R；FIX-8F与FIX-8R。对(1)中的DNA分别进行扩增，获得覆盖检测FIX基因全外显子的扩增产物；

(3)利用1对测序引物M13-F与M13-R对(2)中的扩增产物分别进行正向和反向测序，获得所述扩增产物的基因序列；

(4)将(3)中的基因序列与野生型FIX序列进行比较，确定突变位点是否存在；

其中所述引物序列为：

FIX-1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGTACAACTAATCGACCTTACCACTT

FIX-1-R：AACAGCTATGACCATGCGTGCTGGCTGTTAGACTCT

FIX-2+3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCCTAAAGAGAAATTGGCTTTCAG

FIX-2+3-R：AACAGCTATGACCATGGAATTGCTTACCAACATACTGCTTC

FIX-4F：TGTAAAACGACGGCCAGTTGGCTTCCAGGTCAGTAGTT

FIX-4R：AACAGCTATGACCATGAGGTGAGTCGGAACATCATTATTAC

FIX-5F：TGTAAAACGACGGCCAGTCACTCTTATTTCAAGGCTCCAA

FIX-5R：AACAGCTATGACCATGAAGGAAGCAGATTCAAGTAGGA

FIX-6F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCTTGAGACTCTATTCACTGATTAG

FIX-6R：AACAGCTATGACCATGCATCCCAATAGGTCTGTCTAGTA

FIX-7F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCCAGCACCTAGAAGCCAATA

FIX-7R：AACAGCTATGACCATGCCCTTCTGCCTTTAGCCCAAT

FIX-8F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGTGAACATAATATTGAGGAGACAG

FIX-8R：AACAGCTATGACCATGTTAGTTAGTGAGAGGCCCTGTTAA

M13-F：TGTAAAACGACGGCCAGT

M13-R：AACAGCTATGACCATG。