[发明专利]抗苗勒管激素的荧光免疫层析检测方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗苗勒管激素的检测方法及试剂盒，尤其涉及抗苗勒管激 素的荧光免疫层析检测方法及其检测试剂盒。

背景技术

传统的卵巢功能评估主要以年龄、滤泡刺激激素(FSH)、抑制素B(Inhibin B)、雌激素(E2)、窦卵泡的数目(Antralfolliclecount)、卵巢大小(Ovarian volume)等作为指标，凭藉单一指标无法真实反应卵巢状况。近年来，研究发 现抗苗勒管激素(Anti-Mullerianhormone，AMH)也参与女性卵巢功能调节， 它对卵泡生长起一定的作用，可以作为不排卵妇女卵巢功能异常类型和程度的 标记物。卵巢颗粒细胞释放的AMH在血清中可检测到，AMH的水平与发育的卵 泡数成一定比例。因此，藉由侦测血液中AMH的量，便可做为评估卵巢库存 水位的指标。选择AMH的好处如下：⑴随著年龄增长或卵巢功能开始衰退起 始，在FSH、E2、Inhibin尚未产生变化时，AMH即可明确反应出衰退的徵兆， ⑵在经期或非经期任意天测量AMH，变动性不大，⑶将AMH检测的数据结合其 他指标可以更正确评估卵巢功能。

抗苗勒管激素(AMH)是一个140kDa、由二硫键连接的同源二聚体糖蛋白， 是生长和分化因子超家族中转化生长因子-β家族(TGF-β)中的成员之一，类 似于抑制素和激活素。AMH血清浓度准确地反映了窦状卵泡池的大小，代表了 剩余原始卵泡的数量。AMH水平在相同年龄的妇女中变化显著。现有研究表明， 在多数临床情况下，AMH是目前可用的最好的卵巢储备功能测定方法之一。体 外受精联合胚胎移植技术(IVF)时，可用AMH来预测结果，其作用是预测卵 巢反应情况、有助于建立卵巢超刺激的个体化给药。此外，AMH在预测生殖寿 命，治疗卵巢功能失调(特别是多囊卵巢综合征)、性腺毒癌症治疗或卵巢手 术的起着重要作用。

目前国内外开发的AMH试剂盒多采用酶免疫方法，该方法检测步骤多，操 作过程产生的影响因素较多，检测结果易造成偏差。相对于上述检测方法，荧 光层析免疫分析方法是一种微量分析方法，根据荧光强度，对物质进行定性或 定量分析，具有高灵敏度、选择性强、需样量少和操作简便等优点。

中国专利CN103728459A公开了一种基于量子点的双夹心免疫荧光定量检 测AMH的试剂盒，通过将量子点标记的AMH单克隆抗体、AMH和包被在酶标 板上AMH特异性多克隆抗体结合，将荧光信号固定在酶标板上，通过荧光酶标 仪检测荧光强度确定AMH的浓度。然而该方法检测步骤有酶标板的包被及封闭、 标准品或被检血清的处理、单克隆抗体检测，检测过程中孵化时间长、洗板次 数多，需要配套设备和专业人员。

中国专利CN104730247A公开了一种适于利用双标记时间分辨荧光免疫法 快速检测AMH和INHB的试剂盒，采用镧系元素标记AMH的检测抗体，利用固 定在固相载体上的AMH包被抗体和抗原AMH作用，将荧光物质固定在固相载体 上达到检测AMH的目的，然而该方法在操作上需要孵化和洗板，同样具有操作 复杂、检测灵敏度不高等缺点。

因此，如何开发检测时长短、操作方便、检测结果精确的抗苗勒管激素检 测方法和检测产品成为亟待解决的问题。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种灵敏度高、准确度高、操 作简单、成本低的抗苗勒管激素的检测方法及试剂盒。

本发明一种抗苗勒管激素的荧光免疫层析检测方法，包括以下步骤：

步骤1)探针固定垫制备：将抗苗勒管激素单克隆抗体按比例与活化白蛋白 荧光胶乳微粒偶联反应制得抗苗勒管激素单克隆抗体荧光胶乳微粒，再将所述 抗苗勒管激素单克隆抗体荧光胶乳微粒与羊抗兔IgG荧光胶乳微粒按一定比例 混合得到混合荧光胶乳微粒，所述混合荧光胶乳微粒用荧光探针微球稀释液稀 释后喷在玻璃纤维上制得探针固定垫；

步骤2)免疫层析试纸条制备：将样品垫、探针固定垫、层析膜、吸水纸依 次贴在PVC衬板上，将所述抗苗勒管激素单克隆抗体包被在层析膜的检测线上， 将羊抗兔IgG包被在层析膜控制线上，进而制得免疫层析试纸条，所述层析膜 优选硝酸纤维素膜；

步骤3)样品稀释液制备：将包括有牛血清白蛋白、表面活性剂、分散剂和 防腐剂的混合物与缓冲液混合均匀制得样品稀释液；