[发明专利]一种鼠李糖苷酶的生产方法

说明书

本发明提供了一种鼠李糖苷酶的生产方法，包括以下步骤：(1)取细丽毛壳菌种接种于一级种子培养基中，培养得一级种子液；(2)将一级种子液接种于二级种子培养基中，培养得二级种子液；(3)将二级种子液接种于发酵培养基中，得到混合培养基，后添加蔗糖，流加鼠李糖，得到酶活达到500U/mL以上的发酵液；(4)将发酵液进行过滤，对滤液超滤浓缩，得到酶活达到1250U/mL以上的鼠李糖苷酶酶液；(5)将鼠李糖苷酶酶液以淀粉为载体，进行喷雾干燥，得到酶活达到3500U/mL以上的固体鼠李糖苷酶。上述鼠李糖苷酶的生产方法，工艺简单、操作容易、生产效率高，且生产的鼠李糖苷酶活力高，稳定性好，易于储存。

技术领域

本发明涉及鼠李糖苷酶领域，特别是涉及一种鼠李糖苷酶的生产方法。

背景技术

鼠李糖苷酶是一种水解酶。鼠李糖苷酶的来源比较广，广泛分布于自然界的细菌和真菌中。国内关于鼠李糖苷酶研究，主要集中在代谢产生的鼠李糖苷酶，国外研究相对较多，主要有黑曲霉、白曲霉、棘孢曲霉、青霉菌、拟杆菌属和热微菌门等。鼠李糖苷酶在实际工艺中具有很多潜在的应用价值，如工业上用于去除柑桔汁中柚皮苷的苦味，将橘皮苷水解为鼠李糖和橘皮素糖苷等。其中橘皮素糖苷是工业生产甜味剂的重要前体物。另外，鼠李糖苷酶可以作用于萜烯基糖苷，在改善葡萄汁和饮料的香气成分方面有很重要的应用。它在食品、医药、饲料等行业中得到了广泛应用。其工业化生产是利用微生物发酵法生产，但该方法存在发酵活力低、产量低、生产成本高等限制性因素，故为了克服上述问题，技术人员在应用各种遗传学手段提高微生物的生产性能方面，做了大量工作，而对通过培养方法的改进来提高发酵性能方面所做的工作还有所欠缺。

发明内容

本发明的目的在于提供一种工艺简单、发酵活力高的鼠李糖苷酶的生产方法。

一种鼠李糖苷酶的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取细丽毛壳菌种(Chaetomiumgracile)按5～20％的接种量接种于一级种子培养基中，在25～38℃培养10～30h，控制溶氧在60％以上，培养即得一级种子液；

(2)将所述一级种子液按5～20％的接种量接种于二级种子培养基中，在25～38℃培养10～30h，控制溶氧在60％以上，培养即得二级种子液；

(3)将所述二级种子液按5～20％的接种量接种于发酵培养基中，在25～38℃培养40～55h，控制溶氧在60％以上，得到混合培养基，后按每升混合培养基添加5～10g蔗糖的比例添加蔗糖，并开始按每升混合培养基流加橘皮苷0.5～5g/小时的比例添加橘皮苷，同时控制pH为 4.5～5.5，培养70～96h后即得酶活达到500U/mL以上的鼠李糖苷酶发酵液，其中，所述发酵培养基的成分为：橘皮苷60～80g/L、酵母抽提物10～15g/L、氯化钠3～5g/L、磷酸二氢铵 2～3g/L、硫酸镁0.5～1g/L、氯化锌0.2～0.5g/L、丙酸钙20～30g/L；

(4)将所述鼠李糖苷酶发酵液进行过滤，除去菌体及其他微小颗粒，后对滤液超滤浓缩，直至得到酶活达到1250U/mL以上的鼠李糖苷酶酶液；

(5)将所述鼠李糖苷酶酶液以淀粉为载体，进行喷雾干燥，即可得到酶活达到3500U/mL以上的固体鼠李糖苷酶；

其中，步骤(1)中的所述一级种子培养基和步骤(2)中的所述二级种子培养基的成分都为：橘皮苷60～80g/L、酵母抽提物10～15g/L、氯化钠3～5g/L、磷酸二氢铵2～3g/L、硫酸镁0.5～1g/L、氯化锌0.2～0.5g/L、丙酸钙20～30g/L。

在其中一个实施例中，所述一级种子培养基、所述二级种子培养基的成分都为：橘皮苷 60g/L、酵母抽提物15g/L、氯化钠3g/L、磷酸二氢铵3g/L、硫酸镁1g/L、氯化锌0.2g/L、丙酸钙20g/L。