[发明专利]一种基于钯纳米颗粒可视化检测6-巯基嘌呤的试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于钯纳米颗粒可视化检测6‑巯基嘌呤的试剂盒，该试剂盒包括：具有过氧化物酶活性的钯纳米颗粒液体；3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺‑乙醇溶液；过氧化氢水溶液；pH为4.0磷酸二氢钠‑磷酸氢二钠缓冲液。利用本发明的试剂盒能方便地用于人血清和人尿中6‑巯基嘌呤含量的测定，其具有灵敏度高、选择性好、检测限低。

技术领域

本发明属于纳米技术和仿生技术领域，具体的是涉及一种基于钯纳米颗粒可视化检测6-巯基嘌呤的试剂盒。

背景技术

6-巯基嘌呤，又称巯嘌呤，为嘌呤类抗代谢型抗癌药物，在体内通过阻断次黄嘌呤转变为腺嘌呤核苷酸及鸟嘌呤核苷酸而抑制核酸的合成，临床上主要用于治疗急性白血病、绒毛膜上皮癌和恶性葡萄胎等[Cancer,1999,86(6),1080-1086]。服用6-巯基嘌呤会产生肝损伤和骨髓抑制等副作用。6-巯基嘌呤的活性因个体差异和血浆浓度而异[Biosens.Bioelectron.2013,41,844–847]，对用药病人进行药物浓度监测可以指导临床合理用药且对于减少药物不良反应具有重要意义。因此，为了人类健康，建立一种廉价，高敏感性，高选择性的6-巯基嘌呤检测方法至关重要。到目前为止，6-巯基嘌呤的检测方法有电化学分析法、高效液相色谱法、质谱分析法、毛细管电泳法、拉曼光谱法、荧光光谱法等[Biosens.Bioelectron.2013,41,844–847；J.Electroanal.Chem.2012,665,63–69]。在这些方法中，电化学分析法被广泛地报道且许多修饰电极用于6-巯基嘌呤的检测，但是它们较差的重复性和复杂的电极修饰过程限制了他们在实际样品中的应用；虽然高效液相色谱法、质谱分析法、毛细管电泳法和拉曼光谱法检测6-巯基嘌呤时具有选择性且灵敏，但是它们需要昂贵的设备和有毒的溶剂且往往涉及复杂的样品预处理；于对荧光检测法来说，由于没有分离功能导致选择性较低，所以它的应用有限[Biosens.Bioelectron.2013,41,844–847]。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种基于钯纳米颗粒可视化检测6-巯基嘌呤的试剂盒。

本发明的技术方案概述如下：

一种基于钯纳米颗粒可视化检测6-巯基嘌呤的试剂盒，包括：

1)具有过氧化物酶活性的钯纳米颗粒液体；

2)3,3’,5,5’-四甲基联苯胺-乙醇溶液；

3)过氧化氢水溶液；

4)pH为4.0磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液。

3,3’,5,5’-四甲基联苯胺-乙醇溶液的浓度优选为1-50mM。

过氧化氢水溶液的浓度优选为1-10M。

pH为4.0磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液的浓度优选为20-80mM。

其中，具有过氧化物酶活性的钯纳米颗粒是用下述方法制成：

1)脱氧核苷酸的退火：

将2.5-250μL 2-200μM的脱氧核苷酸水溶液、50-200μL 5-20mM pH为3.0-9.0的磷酸盐缓冲溶液加入1.5mL的离心管中并加入三蒸水使总体积为400μL，混匀；升温至90-100℃，维持5-10min，降至室温；

脱氧核苷酸的序列为

Gb，其中b＝10-200；

Cc，其中c＝10-200；

(GC)d，其中d＝5-100；

(G₂C)e，其中e＝4-70；

(G₃C)f，其中f＝3-60；