[发明专利]检测DOCK2基因多态热点突变情况的引物和方法

说明书

技术领域

本发明属生命科学和生物技术领域，特别涉及检测DOCK2基因多态热点突 变情况的引物和方法。

背景技术

联合免疫缺陷病是一种多基因遗传病，其可分为：x性联遗传、常染色体隐 性遗传型和散发型。联合免疫缺陷病将导致淋巴样干细胞先天性分化异常，婴儿 出生后缺乏T细胞和B细胞，使体液免疫和细胞免疫均发生缺陷，不能合成自 己的免疫球蛋白，从而导致患者对细菌、真菌、病毒等缺乏抵抗力，易发侵袭性 感染。患儿在出生后1-2个月内发病，如得不到有效治疗，多于1岁内死亡。目 前国外已经将该病列为“急诊病例”，一旦诊断明确立即进行造血干细胞移植， 能及时为患儿赢得新生。

DOCK2基因位于人类第5号染色体上，总长446136bp，共52个外显子。 DOCK2基因编码的蛋白质属于CDM蛋白家族。它在造血细胞中特异性表达， 主要在外周血白细胞，并通过活化Rac来参与淋巴细胞的迁移所需的肌动蛋白细 胞骨架重构。当DOCK2基因发生突变，Rac1的活化受损，趋化因子诱导的迁 移和肌动蛋白的聚合在T细胞、B细胞和NK细胞中发生缺陷。缺乏这种基因的 小鼠在淋巴细胞的迁移和引导中表现出严重的损伤。近来Dobbs等人报道，其 在5名联合免疫缺陷病的患者体内发现胞质分裂2基因(DOCK2)的等位基因 突变，其中3名患者通过干扰素或DOCK2表达治疗后正常化。提示Dock2的突 变情况对联合免疫缺陷病有重要意义。对DOCK2的突变检测无疑能对联合免疫 缺陷病的早诊断和及时的针对性治疗起重要作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测DOCK2基因多态突变热点的引物，采用PCR 技术，可用于快速检测骨髓增生异常综合征患者体内DOCK2基因多态位点的突 变情况。所述检测DOCK2基因多态热点突变情况的引物，包括：

扩增DOCK2基因的引物，其碱基序列为：

DOCK2-1F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTATGGGTTGTTTCTTGTCTCCT

DOCK2-1R：AACAGCTATGACCATGCCATCGGAAGTAGGTTAAATGAG

DOCK2-2F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTTTAACCTTTGATTGAATGCCT

DOCK2-2R：AACAGCTATGACCATGTAGGTTGGATTCTTGAGCTGTTT

DOCK2-3F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGTCGCCGAACTGTTTTAT

DOCK2-3R：AACAGCTATGACCATGGAGAAAGAGGCTAAGCAAATACA

DOCK2-4F：TGTAAAACGACGGCCAGTGTTATCCAGGGAGGAGGACTTT

DOCK2-4R：AACAGCTATGACCATGCTCTTCAACTTGCTGTGAGGC

DOCK2-5F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCTTACTGGCTGCTTTACGAG

DOCK2-5R：AACAGCTATGACCATGTATGATGAGGGCTATTGACTGG

DOCK2-6F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTGCAATATTTATTCTGCTTTCG

DOCK2-6R：AACAGCTATGACCATGGTCTCCTTTTTAAAGTCAAAGGG

进一步地，还包括测序引物，其碱基序列为：

检测DOCK2基因的测序引物碱基序列为：

M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT

M13R：AACAGCTATGACCATG

进一步地，引物序列DOCK2-1F和DOCK2-1R是扩增DOCK2基因第6外 显子序列的引物，引物序列DOCK2-2F和DOCK2-2R是扩增DOCK2基因第 22外显子序列的引物，引物序列DOCK2-3F和DOCK2-3R是扩增DOCK2基 因第33外显子序列的引物，引物序列DOCK2-4F和DOCK2-4R是扩增DOCK2 基因第37外显子序列的引物，引物序列DOCK2-5F和DOCK2-5R是扩增 DOCK2基因第40外显子序列的引物，引物序列DOCK2-6F和DOCK2-6R是 扩增DOCK2基因第44外显子序列的引物。