[发明专利]CARL基因缺失、插入突变的检测方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物医学检测技术领域，涉及一种钙网蛋白(Calreticulin,CARL)基因缺失、插入突变的检测方法，具体涉及一种基于CARL基因9号外显子(exon9)L367fs*46(c.1179-1230del)、K385fs*4(c.1234-1235insTTGTC)缺失、插入突变的核酸实时荧光PCR检测方法。

背景技术

骨髓增殖性肿瘤(Myeloproliferativeneoplasms，MPN)是一组以造血干细胞，粒细胞系统，红细胞系统、巨核细胞系统和肥大细胞过度增殖为特征的肿瘤疾病。一般的，MPN包括了：慢性髓性白血病(Chronicmyelogenousleukemia，CML)，真性红细胞增多症(Polycythemiavera，PV)，原发性血小板增多症(Essentialthrombocythemia，ET)，原发性骨髓纤维化(Primarymyelofibrosis，PMF)，慢性中性粒细胞白血病(chronicneutrophilicleukemia,CNL)，慢性嗜酸性粒细胞白血病非特质型(Chroniceosiophilicleukemia,CEL)，肥大细胞增多症(Mastocytosis)，和骨髓增殖性肿瘤未分类型(MPN-U)八个类型。基于Dameshek最初对骨髓增殖性疾病的归纳，PMF、PV、ET与CML合称为经典型MPN；而其余的在流行病学特点、临床表现及实验室特征均有别于上述四种的则被归类为“非经典MPN”。MPN的患者由于血细胞的过度增殖，会导致血液淤滞、粘稠度增加，而引发各种心脑血管疾病。目前MPN的发病率正逐年升高，而且发病年龄有逐步年轻化趋势，因此提高对此类疾病的诊断、治疗水平势在必行。

各个MPN在临床特征和远期预后都存在差异，治疗的目标和手段也有所不同；所以有必要在诊断时能够加以区分，以达到精准医疗的目的。常规的MPN检测诊断指标和方法包括血细胞计数，骨髓穿刺检测，环钻活检，动脉血氧饱和度，碳氧血红蛋白水平，嗜中性粒细胞碱性磷酸酶水平，血清尿酸，维生素B12水平。虽然在一般情况下这些指标可以在一定程度上指示MPN；但值得注意的是，对于其他的因机体自身应激性的骨髓增殖而导致的上述指标升高则无法与肿瘤性增生区分开，容易形成对MPN误诊。更重要的是，上述方法对于“非典型MPN”则无法区分和诊断。

在核酸水平检测诊断MPN是近年来一直发展的新指标。其中CML存在有100％特异性的BCR/ABL基因融合。鉴定后，可针对性的靶向使用受体酪氨酸激酶抑制剂(TKI)。除CML之外其余各类型MPN可统称为BCR/ABL阴性MPN。对于BCR/ABL阴性的MPN，较为经典的分为3类：PV，ET和PMF。因其临床表现相似，需要排除复杂的继发因素，形态学诊断存在诸多难题和不足，而且易受医生主观因素影响。所以这类疾病的明确分子标志基因具有重要临床意义。目前有数个标记指示基因(Bio-marker)被报道。研究发现约81％～99％的PV、约41％～72％的ET和39％～57％的PMF患者带有铬氨酸蛋白激酶2(JanusKinase2,JAK2)JAK2-V617F突变，随后又证实约2％的JAK2-V617F突变PV患者有JAK2第12外显子异常(突变、缺失或插入)。因此，在2008年WHOMPN诊断标准中将存在JAK2-V617F突变或其他功能类似的突变(例如JAK2第12外显子突变)列为PV诊断主要标准之一。对于JAK2-V617F阴性的ET和PMF则可以通过鉴定血小板生成素受体(ThrombopoietinReceptor)突变区(MPL515)，MPL突变检测对于JAK2-V617F突变阴性的ET和PMF的诊断和治疗是十分必要的，所以MPL515突变检测也已经列入了WHO制定的诊断特发性血小板增多症和原发性骨髓纤维化的指标之一。