[发明专利]一种依非韦伦中依非醇含量的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及用高效液相色谱-质谱联用仪直接测定出依非韦伦中依非醇(以下简称化合物I)的含量。此方法能较好的控制原料药及制剂中痕量化合物I含量，为患者的健康安全用药提供保障，属于医药技术领域。

技术背景

依非韦伦，化学名Efavirenz。

是一种抗HIV病毒药物^[1]，属人免疫缺陷病毒–1型(HIV-1)的选择性非核苷反转录酶抑制剂(NNRTIS)，通过非竞争性结合并抑制HIV-1逆转录酶(RT)活性，作用于模版、引物或三磷酸核苷，兼有小部分竞争性的抑制作用，从而阻止病毒转录和复制。依非韦伦结构如下：

依非韦伦中含有反应残留的化合物I，结构如下：

准确定量地测定依非韦伦中痕量的化合物I含量极具挑战性。很难采用气相、液相色谱等对其进行痕量直接测定。

目前，只有测定依非韦伦中常量依非醇含量的方法采用经典的色谱法,其专一性、灵敏度、方法精密度和重复性都存在很大的缺陷，不能提供可靠的痕量分析结果。为了克服原方法的缺陷，本发明采用高效液相色谱-质谱联用仪直接测 定依非韦伦中化合物I的含量。该分析方法具有操作简单、专一性好、灵敏极高、重现性好等特点。

发明内容

如上所述，直接准确定量测定痕量化合物I存在各种缺陷。然而,利用化合物I具有稳定性强和非常适合反相液相色谱分离的特征，以及在质谱检测器中很容易离子化并具有稳定的适合定量分析的分子结构的特点，可以采用高效液相色谱-质谱联用仪直接测定。除此之外,化合物I在质谱检测器有灵敏的吸收这一特征使本方法的灵敏度和专一性大大提高。

通过试验发现依非韦伦在乙腈中有非常好的溶解性。本发明将用乙腈作为稀释剂。

本发明涉及一种依非韦伦中化合物I含量的测定分析方法，该方法为直接用高效液相色谱-质谱联用仪测定依非韦伦中化合物I的含量。

上述样品配制中用乙腈作为稀释液。

上述采用高效液相色谱-质谱联用仪，正离子选择离子模式。

该方法包括以下几个步骤：

(1)取依非韦伦原料或制剂粉末，以乙腈溶液作为稀释液制备得到样品溶液；

(2)采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸水溶液和乙腈，进行梯度洗脱。

(3)设置流动相流速为0.3-1.2mL/mL，柱温控制在25℃-40℃之间。

(4)取步骤(1)的样品溶液5uL，进样，记录质谱总离子流图。

(5)采用质谱检测器，离子模式选择正离子，取(1)的样品溶液进样，记录化合物I质谱离子流图。

本发明采用的技术方案如下：

样品前处理：

稀释液：采用色谱级的乙腈。

化合物I标准溶液：用稀释液精密配制25ng/ml的化合物I溶液。

样品溶液：精密称取100mg样品于10ml的容量瓶中，用稀释液溶解并定容至刻度，进样。

本发明使用色谱柱为：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。流速0.3-1.2mL/mL。柱温25℃-40℃。流动相A：0.05％-0.2％甲酸或乙酸或三氟乙酸水溶液，流动相B：乙腈，梯度如下：

AB0min90％10％8min10％90％

质谱检测器：正离子模式，[M+H]⁺:290

附图说明：