[发明专利]一对用于连接非依赖克隆的接头序列及其应用在审
| 申请号： | 201511027677.5 | 申请日： | 2015-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN105524919A | 公开（公告）日： | 2016-04-27 |
| 发明（设计）人： | 赵晋平;彭杰军;鲁宇文;燕飞;程晔;陈剑平 | 申请（专利权）人： | 浙江省农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/63 |
| 代理公司： | 杭州杭诚专利事务所有限公司 33109 | 代理人： | 尉伟敏;侯兰玉 |
| 地址： | 310021 浙江省杭州*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一对 用于 连接 依赖 克隆 接头 序列 及其 应用 | ||
1.一对用于连接非依赖克隆的接头序列，其特征在于：该接头序列包括 上游序列：gggAgCggAAgCgg，SEQIDNO：7所示的核苷酸序列；和 下游序列：gCCagAgCCACCgc，SEQIDNO：8所示的核苷酸序列。
2.一种权利要求1所述的接头序列在连接非依赖克隆方面的应用，其特征 在于：
a、序列的获得人工合成权利要求1所述的接头序列；
b、利用分子生物学技术将接头序列连接到质粒载体的多克隆位点位置 后，形成的新的载体，对外源片段进行连接非依赖的克隆。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于b步骤具体是：合成扩增Gat eway盒的引物，其中上下游接头序列分别位于上下游引物的5’末端，通过 PCR扩增Gateway盒，通过酶切连接克隆入目的载体的多克隆位点，形成 新的载体作为连接非依赖的克隆，其中该载体的多克隆位点的上下游位置 分别为所述的上下游接头序列；
进行连接非依赖克隆时，所述的上下游接头序列分别设计与目的基因的上 下游引物5’末端，通过PCR扩增获得侧翼序列为上下游接头的目的基因片 段；
通过T4DNA聚合酶处理载体和中介片段，获得5’末端突出的载体和中间 片段，其中的末端突出为接头序列；通过将5’末端突出的载体和片段混合， 形成碱基互补配对，转化，形成完整的质粒载体，完成对目的片段的克隆。
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