[发明专利]一种利用食药真菌发酵三叶青获得的组合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及三叶青的加工利用领域，具体涉及一种利用食药真菌发酵 三叶青获得的组合物及其制备方法。

背景技术

三叶青(TetrastigmahemsleyanumDielsetGilg)为葡萄科崖爬藤属植 物，别名：金线吊葫芦、石老鼠、蛇附子、属鼠李目，葡萄科草质藤本。 学名：三叶崖爬藤，是浙江、福建等地区传统习用青草药，以地下块根和 果实的药用效果最好。在浙江民间用三叶青治疗肿瘤较为久远，三叶青是 地方性药材，极为珍稀，分布在浙江、江西、福建、安徽、广东、广西、 云南等地，三叶青具有散热、理气、活血、补脾、解毒、祛风、消炎的作 用，民间用来治疗小儿高热、慢性咽喉炎、扁桃体炎、肝炎、肺炎、胃炎、 淋巴结核及蛇咬伤等有奇效。现代药理研究表明三叶青具有抗炎、镇痛及 解热、抗肿瘤、抗病毒、调节免疫等作用。

目前，三叶青中的活性成分多采用传统的提取、分离方法得到，如 中国专利ZL200510050649.5中公开的用于预防和治疗肿瘤的中药三叶 青，其采用的是由三叶青为原料的水和/或醇提取物作活性成分。中国专 利申请CN201110264176.4中公开的超临界二氧化碳萃取三叶青总黄酮的 方法，将三叶青药材粉碎60-80目，加入超临界二氧化碳萃取罐，通入液 态二氧化碳和夹带剂，在压力20-30MPa、温度40-50℃条件下，萃取2-3 小时，分离器中减压解析萃取物，回收试剂，干燥得三叶青总黄酮。中 国专利ZL200810120750.7公开了一种从三叶青中高效提取黄酮类化合物 的工艺，其工艺流程为:原料三叶青，风干，切碎，加入水于超声波提取 器中提取，将提取液浓缩至一定体积，再用活性炭进行吸附脱色。接着 利用空化混悬萃取分离装置，先用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，将水 溶液部分用氯仿萃取，回收氯仿，将水溶液部分浓缩至无有机试剂味， 通过大孔吸附树脂，依次用水和50％乙醇洗脱，收集50％乙醇洗脱液， 回收溶剂至干，即得到三叶青提取物。

三叶青中含有多糖、黄酮、多酚等活性成分和淀粉、蛋白质等营养成 分，传统的提取、分离其活性成分工艺中，淀粉、蛋白质、刺激性成分等 成分会一道提取出，增加了分离中的处理步骤，导致最终产品中的活性成 分含量偏低、活性偏低。

发明内容

本发明提供了一种利用食药真菌发酵三叶青获得的组合物，该组合物 中活性成分的含量和活性高，具有良好的降血脂功能。

本发明还提供了一种利用食药真菌发酵三叶青获得的组合物的制备 方法，利用多种真菌发酵三叶青，有助于提高最终产品中活性成分的含量 和活性，得到具有降血脂功能的发酵组合物。

本发明发现，根据三叶青营养成分和有效成分特点，通过本发明特定 的真菌发酵及特定的工艺，并向培养基中添加白芨，能够有效地将三叶青 中的营养成分和有效成分进行生物降解和利用、有效地将三叶青中的刺激 性成分去除和转化，使三叶青资源得到充分的利用，有助于提高最终产品 中活性成分的含量和活性。

本发明采用的技术方案是：

一种利用食药真菌发酵三叶青获得的组合物的制备方法，包括步骤：

(1)取活化后的巴西蘑菇菌种接种到液体MRS培养基中培养2天-8 天，离心收集第一菌体；将第一菌体悬浮在含胆盐的液体MRS培养基中 于18℃-30℃孵育1h-20h，离心收集第二菌体；将第二菌体经PBS缓冲液 清洗干净后重新悬浮于液体MRS培养基中，震荡摇匀得到第二菌体液， 将第二菌体液接种到含胆盐的液体MRS培养基中于18℃-30℃再培养1 天-10天，得到巴西蘑菇液体种子液；

(2)取活化后的链霉菌菌种接种到液体MRS培养基中培养3h-30h， 离心收集第三菌体，将第三菌体悬浮在含NaCl的液体MRS培养基中于 20℃-30℃孵育0.5h-15h，离心收集第四菌体；将第四菌体经PBS缓冲液 清洗干净后重新悬浮于液体MRS培养基中，震荡摇匀得到第四菌体液， 将第四菌体液接种到含NaCl的液体MRS培养基中于20℃-30℃培养 3h-30h，得到链霉菌种子液；

(3)将步骤(1)的巴西蘑菇液体种子液接入三叶青固态发酵培养基 中，在18℃-30℃培养2天-20天，然后置于交变磁场环境中再培养5天-30 天，培养产物经真空冷冻干燥、粉碎后得三叶青固态发酵产物；所述三叶 青固态发酵培养基中含有三叶青和白芨；