[发明专利]用于分离淋巴细胞的组合物及其分离液

说明书

本发明公开了一种用于分离淋巴细胞的组合物及其分离液，属于生物技术领域。本发明的用于分离单个细胞的组合物，由以下原料按重量份组成：右旋糖酐1～4份，海藻糖4～6份，超低粘度海藻酸钠0.3～1.5份，泛影葡胺4～7份，L‑甲硫氨酸0.003‑0.006份,L‑缬氨酸0.008‑0.011份和L‑亮氨酸0.01‑0.012份。本发明配方中的全部原料均符合静注级原料药标准，原料不确定性小，安全性高，并且分离后的淋巴细胞具有较好的杀肿瘤活性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于分离淋巴细胞的组合物及其分离液。

背景技术

密度梯度离心法(Density Gradient Centrifugation)作为一种传统的分离技术，用于细胞分离已经存在了半个世纪。基于密度梯度离心法的细胞分离介质产品即细胞治疗辅料，将待分离的血液样品平铺于分离介质上，接着对其在恒定温度下进行低速离心。样品中各细胞群将由于密度差异分布在离心管的不同部位，例如，如果分离介质具有与目标细胞群相同的密度，目标细胞将富集在分离介质层与样本层的交界面，用吸管将该层细胞吸出就达到了对目标细胞群的分离。

淋巴细胞作为一种效应细胞，广泛存在于人外周血液、骨髓或人脐带血中。高纯度的淋巴细胞的获取对于疾病的细胞学诊断、成分输血、治疗用细胞产品的制备等具有非常重要的意义。淋巴细胞分离介质是具有恒定密度、渗透压及pH值的混合体系。

目前，商品化的淋巴细胞分离介质以Ficoll 400(聚蔗糖400)和泛影酸钠为主要成分，密度在1.073g/cm³和1.084g/cm³之间，渗透压在280mOsmol/kg和310mOsmol/kg之间，pH在6和9之间。为了提高产品的技术标准以适应细胞治疗特殊行业要求，目前很多研究者都在试图改进分离介质的组成以用于临床治疗用途。

除法规因素外，产品特性不明确是限制其临床使用的另一个重要因素。在淋巴细胞的工业化生产过程中，细胞分离介质是仅次于培养基外，与细胞接触时间最久的外源物质。在标准的分离过程中，细胞必须与分离液接触15-45分钟的时间，以达到最佳分离效果。在这段时间内，分离液中各组分可能通过被动扩散、细胞的主动运输、胞吞/胞饮作用、表面黏附等途径，在细胞内部蓄积，且此部分蓄积成分，很难通过常规的洗涤从分离得到的目标细胞(例如淋巴细胞)中完全去除。尽管常规理化指标及菌落、内毒素等生化指标外已达到较高标准，但原料组分的不确定性给细胞分离介质的临床应用带来了极大的障碍。例如，Ficoll 400并无临床应用，其毒理学、药物代谢动力学特性均没有相关数据支撑。Ficoll400在分离中不表现出对细胞的毒性，但化学品安全说明书(MSDS)中的数据显示，慢毒试验中Ficoll 400表现出一定毒性，包括恶心、呕吐、头痛甚至昏迷，皮肤严重红肿、水肿等。

曾有研究者使用右旋糖酐代替Ficoll 400，提高了一定的安全性，并使用羟乙基淀粉提高分离效率。虽然羟乙基淀粉(Hydroxyethyl Starch)是复方制剂，但长期大剂量使用羟乙基淀粉，患者会出现皮肤瘙痒。严重肝脏疾病或严重凝血功能紊乱的病人应慎用。使羟乙基淀粉在临床中的应用受到限制。

因此，有必要提供一种既能保证安全性又能保证分离效率、纯度的淋巴细胞分离液。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种既能保证安全性又能保证分离效率、纯度的价格便宜的用于分离淋巴细胞的分离液及其分离方法。

为解决上述技术问题，本发明提供技术方案如下：

一方面，提供一种用于分离淋巴细胞的组合物，由以下原料按重量份组成：

所述右旋糖酐与海藻糖的比例范围为1:1～1:4，优选为1:2。