[发明专利]抗肿瘤活性α-螺旋多肽及其制备方法

说明书

本发明公开了一种WT p53衍生物。本发明还公开了上述WT p53衍生物的制备方法和应用，所述衍生物为在相对于序列WT p53和SAH‑p53‑8第i和i+7的位置上的氨基酸使用常用天然半胱氨酸来替换母体肽链上相应的氨基酸残基，然后通过硫醚订合形成大环桥来稳定母体多肽的α‑螺旋结构。所述衍生物在抗肿瘤方面具有应用前景。

技术领域

本发明涉及WT p53抗肿瘤活性α-螺旋多肽及其制备方法，同时还涉及其在生物学上对肿瘤的治疗作用。

背景技术

现代医学认为肿瘤是一种基因疾病。p53是一种非常重要的人类肿瘤抑制基因，它具有DNA修复、细胞周期阻滞、凋亡的功能。由其表达产生的p53蛋白是一种肿瘤抑制功能的执行者。MDM2是1987年发现的致癌基因。MDM2的表达产物是一种重要的p53负性调节蛋白。癌基因MDM2及其表达产物可与p53蛋白结合，同时抑制p53的正常生物学功能，从而可导致肿瘤的发生和发展。

p53肿瘤蛋白是一个多功能蛋白。在不同形态(如低氧、热休克、DNA损伤等)的肿瘤诱导下，p53抑癌蛋白被激活，直接或间接地通过其他转录因子阻止细胞生长，诱导细胞凋亡。一旦p53失活或缺失，肿瘤就得到发生发展。癌基因MDM2在很多肿瘤中表现出扩增，如：13％食道癌、10％高分化神经胶质瘤和20％软组织肉瘤中都有MDM2的扩增。

Kussie等人于1996年报道了p53-MDM2复合物的晶体结构。晶体结构表明p53和MDM2蛋白的结合界面面积为14.98nm²，疏水作用是两者之间主要的结合力。晶体结构同时表明p53蛋白的N端反式激活区域与MDM2蛋白的p53结合区相互作用，形成p53-MDM2复合物。p53的N端17-27位的11个氨基酸形成的α螺旋复合物可紧密地嵌合到MDM2的N端103个(25-127位)氨基酸形成的疏水裂隙中，二者之间主要靠疏水作用结合。

Verdine等人于2007年将多肽WT p53(17-29位)作为模板，利用侧链带有末端烯烃的非天然氨基酸替换母体WT p53肽链上相应的氨基酸残基，然后通过Grubbs催化剂关环“钉合”成具有生物活性的α-螺旋多肽。通过一系列优化实验最终找到抑制癌细胞效果最好的构象锁定多肽SAH-p53-8(EC50＝8.8μM)。

发明内容

本发明的一个目的是针对WT p53在体内稳定性差、与靶蛋白结合能力有限和细胞透过性差等方面的缺陷，设计了一系列新的WT p53衍生物。本发明的另一个目的是提供该WT p53衍生物的制备方法。

WT p53序列：Ac-LSQETFSDLWKLLPEN-NH₂

SAH-p53-8序列：

发明人认为，鉴于p53重要的药学应用价值，有必要选择具有生物活性的多肽WTp53和SAH-p53-8作为模板，使用价格便宜且易得的Cys来替换母体肽链上i/i+7位置上的氨基酸，然后通过肽链上两个半胱氨酸侧链的巯基与连接臂环合形成硫醚桥，来稳定母体多肽的α-螺旋构象，并研究其在提高α-螺旋度、靶蛋白结合能力、细胞穿膜性等方面的性质，从而建立一种新型的、简单高效的稳定合成多肽α-螺旋构象的化学修饰方法，由此完成了本发明。

发明人选取WT p53和SAH-p53-8作为模板，保持作用位点氨基酸不变，使用便宜易得的半胱氨酸替换母体肽链上相应位置的氨基酸残基，得到如下多肽化合物：