[发明专利]一株对植物病原细菌有显著拮抗作用的假单胞菌的分离与应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物领域，涉及一株对植物病原细菌有显著拮抗作用的假单胞菌的分离与应用，特别是涉及一种拮抗烟草和花生等作物青枯病菌(Ralstoniasolanacearum)、大白菜软腐病菌(Pectobacteriumcarotovora)和番茄细菌性溃疡病菌(Clavibactermichiganensis)等植物病原细菌的假单胞菌的分离、鉴定及应用。

背景技术

烟草青枯病是由青枯劳尔氏菌(Ralstoniasolanacearum)引起的一种典型的系统性维管束病害，主要为害烟草根、茎、叶各部分维管束组织，是热带、亚热带地区烟草的主要病害之一，在我国长江流域及其以南烟区普遍发生。近年来，该病发生危害逐渐向北方烟区扩展，在山东、河南及辽宁等省均有发生，且为害较重，是威胁我国烟草生产的一大毁灭性病害。烟草青枯病菌寄主范围广泛，可侵染50多个科200多种作物，是番茄、马铃薯、烟草、花生、茄子、生姜等作物上的重要病害(Genin等，2004；Hayward1991)。病菌主要在土壤、堆肥中越冬，也可以附着在种子、植物根际及植物的病残组织中越冬。病原菌可随雨水，灌溉及农事操作机械进行远距离传播。染病植株初期一侧叶片呈青绿色萎蔫,茎上出现黑色条斑。随着病情扩展症状可延及植株顶部，维管束浅褐色至黑褐色，侧根变黑腐烂，另一侧茎、叶和根生长正常。病情发展后全部叶片青枯、萎蔫，茎上黑色条斑增多，维管束及根变黑，整株枯死。

另外，由大白菜软腐病菌(Pectobacteriumcarotovora)和番茄细菌性溃疡病菌(Clavibactermichiganensis)引起的大白菜软腐病和番茄细菌性溃疡病是蔬菜生产中常见且危害严重的病害。由于蔬菜生产周期短，传统的化学农药在防治该类病害时存在污染环境、降解周期长以及农药残留等问题，对人和其他动植物安全存在危害。因此，寻求低(无)毒、高效、无残留且对人畜无害的治疗方案成为当务之急，其中生物防治是行之有效的方法之一。

假单胞菌(Pseudomonasspp.)是活跃在植物根际和叶面的一类微生物，属内许多菌株属于植物根围促生细菌，能防治植物病害、促进植物生长。这些具有生防促生作用的菌株尤以荧光性假单胞菌(Fluorescentpseudomonasspp.)为主，另外还包括铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)、绿针假单胞菌(P.chloraphis)(刘邮洲等，2015)等。大量研究表明，生防细菌在其生长代谢过程中，会产生和分泌多种拮抗或竞争性的代谢产物，通过直接或间接的作用杀死或抑制病原菌的生长(陈晓斌等，2000；胡江春等，2004；杨海莲等，2000；于晓庆等，2007)。目前研究的比较透彻的有，2,4-二乙酰基间苯三酚(2,4-diacetylphloroglucinol)(Combes-Meynet等，2011)、吩嗪(phenazine)(Thomashow等，1988)、硝吡咯菌素(pyrrolnitrin)(Arima等，1964)、藤黄绿菌素(pyoluteorin)(Schnider-Keel等，2000)以及环状脂肽(Cycliclipopeptide)(Raaijmakers等，2006)等化合物，在植物病害的生物防治中起着关键的作用。

植物根际有益微生物对环境友好，抑菌谱广泛，而且对动植物安全，在防治植物病害等方面效果显著，已引起研究人员的广泛关注并成为当前研究的热点，展现出良好的应用前景。

发明内容

本发明涉及一株对植物病原细菌有显著拮抗作用的假单胞菌的分离与应用；目的是提供一株对烟草和花生等作物青枯病菌(Ralstoniasolanacearum)、大白菜软腐病菌(Pectobacteriumcarotovora)、番茄细菌性溃疡病菌(Clavibactermichiganensis)等植物病原细菌有显著拮抗效果的菌株XQ10。通过API20NE非肠道革兰氏阴性杆菌鉴定系统，16SrRNA和基于gyrB，rpoB和rpoD的多位点序列分型分析，证明该菌株为假单胞菌。

本发明是采用如下技术方案实现的：