[实用新型]用于检测多发性骨髓瘤浆细胞基因的试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于免疫学技术领域，涉及一种用于检测多发性骨髓瘤浆细胞IGH/FGFR3、GH/CCND1、IGH/MAF、1q21、TP53基因的试剂盒。

背景技术

多发性骨髓瘤(MM)是以骨髓中克隆性浆细胞恶性增殖和异常积聚为特征的肿瘤，表现为单克隆免疫球蛋白或轻链(M蛋白)过度生成、骨骼破坏、贫血、肾功能受损和免疫功能异常，MM病变在形态学上可能是相似的。已在基因和分子学水平将该病分为几种亚型，多发性骨髓瘤患者中已确定的特殊的染色体异常包括异位、缺失或扩增，17p13缺失(肿瘤抑制基因的基因座，p53)可导致TP53基因杂后性丢失，被认为是MM的高危特征，其中其他高危的染色体畸变都具有结构性变化的特征，包括涉及位于14q32的IGH基因(编码免疫球蛋白重链)的特殊重排，根据14q21的易位可将患者分为几个亚型，其中三个主要的亚型为t(11；14)(q13；q32)基因为IGH/CCND1、t(4；14)(p16；q32)基因为IGH/FGFR3、t(14；16)(q32；q23)基因为IGH/MAF。1号染色体异常也常见于MM染色体变化当中，短臂常与缺失相关，长臂常与扩增相关，1q21的获取/扩增增加了MM发生进展的风险，复发患者存在1q21扩增的几率比新诊断患者要高。

荧光原位杂交技术(fluorescent in situ hybridization)，简称FISH，是利用荧光标记的特异核酸探针与细胞内相应的靶DNA分子或RNA分子杂交，通过在荧光显微镜或共聚焦激光扫描仪下观察荧光信号，来确定与特异探针杂交后被染色的细胞或细胞器的形态和分布，或者是结合了荧光探针的DNA区域或RNA分子在染色体或其他细胞器中的定位。目前，常用FISH技术来检测多发性骨髓瘤，多发性骨髓瘤患者的肿瘤细胞在骨髓内比例较低且分布不均匀，加之骨髓抽吸过程中会发生外周血的稀释，因此进行FISH检测时，常受到正常细胞的干扰而无法准确地识别肿瘤细胞，当骨髓涂片细胞中浆细胞比例小于30％，或流式细胞仪检测浆细胞比例小于10％时，FISH检测就会出现假阴性，影响了结果的准确判读。

实用新型内容

为了解决上述技术问题，本实用新型的目的在于提供用于检测多发性骨髓瘤浆细胞IGH/FGFR3、GH/CCND1、IGH/MAF、1q21、TP53基因的试剂盒，本实用新型采用CD138磁珠分选(MACS)可有效的筛选/富集浆细胞，排除其他细胞干扰，减少假阴性，提高了检测阳性率。

为实现上述目的，本实用新型采取的技术方案是：一种用于检测多发性骨髓瘤浆细胞IGH/FGFR3、GH/CCND1、IGH/MAF、1q21、TP53基因的试剂盒，包括盒体(1)、盒盖(2)和设置在盒体(1)内的衬垫(3)，所述衬垫(3)上设有小孔，装有IGH/FGFR3荧光探针的试剂管(4)、装有IGH/CCND1荧光探针的试剂管(5)、装有IGH/MAF荧光探针的试剂管(6)、装有1q21荧光探针的试剂管(7)、装有TP53荧光探针的试剂管(8)、装有20×SSC洗液的试剂管(9)、装有NP40裂解液的试剂管(10)、装有DAPI染色液的试剂管(11)、装有CD138免疫磁珠的试剂管(12)、装有auto MACSTM Running Buffer(自动免疫磁珠细胞分选缓冲液)的试剂管(13)、装有WholeBlood Column Elution Buffer(全血过柱洗脱液)的试剂管(14)、装有固定液的试剂管(15)和装有胃蛋白酶的试剂管(16)被设置在所述小孔内。其中，自动免疫磁珠细胞分选缓冲液为购买自德国MiltenyiBiotech公司的auto MACSTM Running Buffer；全血过柱洗脱液为购买自德国MiltenyiBiotech公司的WholeBlood Column Elution Buffer。

其中，上述IGH/FGFR3荧光探针为检测IGH/FGFR3基因的常规探针；上述IGH/CCND1荧光探针为检测IGH/CCND1基因的常规探针；上述IGH/MAF荧光探针为检测IGH/MAF基因的常规探针；上述1q21荧光探针为检测1q21基因的常规探针；上述TP53荧光探针为检测TP53基因的常规探针。

其中，所述固定液为冰醋酸与甲醇体积比为1：3的试剂。

其中，所述20×SSC洗液、NP40裂解液、DAPI染色液、CD138免疫磁珠、auto MACSTM Running Buffer、WholeBlood Column Elution Buffer和胃蛋白酶均为本领域常规试剂。