[实用新型]快速检测大豆Bowman-Brik胰蛋白酶抑制因子的胶体金免疫层析试纸

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种快速检测大豆Bowman-Brik胰蛋白酶抑制因子（Bowman-Briktrypsininhibitor，BBI）的胶体金免疫层析试纸。

背景技术

大豆蛋白质含量丰富，氨基酸组成平衡，且富含不饱和脂肪酸，是人体和动物体重要的植物蛋白和植物油来源。由于其种植面积广，产量大，长久以来一直被广泛应用于食品和饲料的加工原料，对于人类健康和动物营养具有极高的使用价值。然而，大豆中也含有多种抗营养因子，这些抗营养因子在很大程度上影响了大豆的开发与利用。

大豆胰蛋白酶抑制因子（SoybeanTrypsinInhibitor，STI）是大豆主要抗营养因子之一，STI大约有7~10种，但目前只有2种胰蛋白酶抑制因子的研究较为广泛，分别是Kunitz胰蛋白酶抑制因子（KTI）和Bowman-Brik胰蛋白酶抑制因子（BBI）。Kunitz大豆胰蛋白酶抑制因子主要对胰蛋白酶直接地、专一地起作用。而BBI含有大量的半胱氨酸，具有两个独立的反应中心，同时具有抑制胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶活性的能力。当食糜中胰蛋白酶与BBI结合而减少时，肠促胰酶肽分泌也增加，这种双重刺激胰腺分泌，将会造成胰腺分泌失调性肥大和增生，出现食物性消化吸收功能失调或紊乱，严重时出现头晕、恶心、腹泻。因此，国内外研究人员对大豆胰蛋白酶抑制因子的失活方法进行了大量探索，但这些方法并不能完全消除其影响。所以建立快速、准确的检测方法来检测食品及饲料中BBI的含量显得尤为重要。

目前，已有一些利用BBI多克隆抗体或者单克隆抗体建立的ELISA方法能够对BBI进行特异、灵敏的检测。而免疫层析试纸检测方法相对于ELISA方法更为快速，且具有成本低、便携、易操作等优点，可用于大批量样品的定性与定量检测，在准确性和灵敏度上也能够满足要求，该法分析过程简单，用作BBI的检测有独特优势，是需要优先发展的检测技术。目前没有发现关于BBI免疫层析试纸检测方法的报道，所以该方法将会成为大豆胰蛋白酶抑制因子检测方法的一个发展方向。

实用新型内容

本实用新型要解决的技术问题：针对现有技术存在的不足，提供一种特异、灵敏、简便、安全、快速检测BBI的免疫层析试纸。

本实用新型的技术方案：

一种快速检测BBI的胶体金免疫层析试纸，底层为支撑层，中间层为吸附层，保护层固定在吸附层上，吸附层从测试端依次为样品垫、结合垫、纤维素膜和吸水垫。在纤维素膜设有用BBI兔源多克隆抗体溶液喷点的检测线以及用羊抗小鼠IgG抗体或兔抗小鼠IgG抗体溶液喷点的质控线；所述结合垫吸附有胶体金纳米颗粒标记的BBI鼠源单克隆抗体。

所述支撑层用不吸水的韧性材料制成；样品垫用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制成；结合垫用玻璃纤维棉、聚酯膜、醋酸纤维或尼龙膜制成；纤维素膜用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜制成；吸水垫用吸水滤纸或滤油纸制成。纤维素膜上的隐形检测线和隐形质控线为平行排列的“︱︱”直线式，或为其他类似印记。

快速检测BBI的胶体金免疫层析试纸的制备方法：包括用胶体金纳米颗粒标记的BBI鼠源单克隆抗体（金标单抗）制备结合垫，用BBI兔源多克隆抗体溶液喷点隐形检测线，用羊抗小鼠IgG抗体或兔抗小鼠IgG抗体溶液喷点隐形质控线，然后在支撑层上黏贴样品垫、结合垫、纤维素膜和吸水垫。在所述样品垫、结合垫及吸水垫上覆盖有保护膜，在样品垫与结合垫交界处对应的保护膜上喷点有样品标记线，最后加上保护层。