[实用新型]一种II型志贺毒素时间分辨荧光免疫检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及定量检测血清中II型志贺毒素含量的时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)试剂盒，属于体外试剂诊断技术领域。

背景技术

肠出血性大肠杆菌(EnterohemorrhagicEscherichiacoli,EHEC)是大肠杆菌的一个亚型，可引起感染性腹泻，因能引起人类的出血性肠炎而得名。EHEC感染在世界各地包括发达及发展中国家都有流行，其感染具有暴发性、强烈的致病性与致死性等特点，是一种重要的人畜共患病，对人类健康构成巨大威胁。

研究表明，EHEC感染的主要致病机理之一是分泌志贺毒素(Shigatoxin,Stx)，该毒素分为StxⅠ和StxII两个亚型，其中StxII的毒性最强，能引起病人的溶血性尿毒综合征(HemolyticUremicSyndrome,HUS)，危及生命。菌体在病人肠道中分泌StxII可以穿越破损的肠上皮细胞进入血液循环，与靶器官上皮细胞受体，丙糖酰基鞘氨醇(Globotriaosylceramide,Gb3)或丁糖酰基鞘氨醇(Globotetraosylceramide,Gb4)结合，造成肠道、中枢神经系统等器官的损伤，特别是Gb3受体丰度较高的肾脏。由于StxII是由整合到EHEC基因组中类λ噬菌体基因编码，临床上使用的某些抗生素，如喹诺酮类(环丙沙星等)，容易使细菌进入SOS应激状态，噬菌体从静止的溶源状态进入裂解状态，在肠道内产生大量的StxII毒素，并进入血液循环，使患者发生HUS。而临床上对EHEC引起的前期腹泻和其他病原体所引起的腹泻在症状上不易区分，抗生素的使用一方面杀死部分菌体，患者腹泻症状消失，造成表观“康复”的假象；另一方面，刺激残存的菌体分泌StxII毒素，从而诱发患者的HUS。因此，作为引发HUS的物质基础，EHECStxII的检测将直接有助于对分离菌株致病力强弱的判定，提高对高致病性大肠杆菌的检出。

由于目前临床上对EHEC感染缺乏有效的治疗和预防措施，如能在患者的血清、或腹泻的血便中检出毒素，快速、准确地诊断病原，则能及时采取免疫干预措施。对于病人救治方案的制定、传染源头追踪和整个疫情控制均具有重大意义

与发达国家不同，我国疫情主要集中在卫生保健条件较差的农村地区，患者主要是农民，就医观念薄弱，大多具有群发性特点，等到卫生机构介入时，疫情已比较严重；目前，与人居住环境关系密切的家畜、家禽带菌情况较为普遍，并且菌群的毒力基因改变明显，从StxⅠ、StxII并存为主逐步演变为StxII为主，提示EHEC疫情不可能短期内消失。并且我国农村基层医疗卫生机构不同程度存在抗生素滥用的现象，也迫切需要一种以毒素分子为靶向的快速、易操作的诊断方法，作为传统依靠病原体分离进行确诊的补充。

采用时间分辨荧光测量技术，以稀土离子为示踪材料，研制的StxII的TRFIA试剂盒具有测量灵敏度高、操作简便、示踪物稳定、定量分析量程宽、无放射性污染等优点，是目前StxII检测方法中最灵敏、测量范围最宽的方法之一，非常有利于大规模的普查筛选及患者病程检测。

实用新型内容

本实用新型的目的是提供一种II型志贺毒素时间分辨荧光免疫检测试剂盒，运用镧系元素铕的荧光放大效应，达到灵敏度高、特异性好、量程范围宽的目的。该试剂盒能够实现快速、简便的检测。

本实用新型是通过以下技术方案实现的：

一种II型志贺毒素时间分辨荧光免疫检测试剂盒包括盒体、盒盖，其特征在于，所述盒体内有一个中间板，所述中间板上设置一个包被有STXⅡ单克隆抗体的微孔板凹槽，所述凹槽内放置包被有STXⅡ单克隆抗体的微孔板；中间板上还设置:六个STXⅡ参考标准品试剂瓶孔，STXⅡ参考标准品试剂瓶孔内放置STXⅡ参考标准品试剂瓶；一个Eu标抗STXⅡ单克隆抗体试剂瓶孔，Eu标抗STXⅡ单克隆抗体试剂瓶孔内放置Eu标抗STXⅡ单克隆抗体试剂瓶；三个较大的孔，分别为增强液试剂瓶孔，增强液试剂瓶孔内放置增强液试剂瓶；浓缩洗板液试剂瓶孔，浓缩洗板液试剂瓶孔内放置浓缩洗板液试剂瓶；缓冲液试剂瓶孔，缓冲液试剂瓶孔内放置缓冲液试剂瓶。

进一步，所述中间板与盒体非一体设置，分离的中间板可以取下，方便对盒体内的清理。

进一步，盒体上可设置任意阻挡结构，只要保证中间板有效放置在盒体中部即可，其中优选为在盒体内设置阻挡环，中间板放置在阻挡环上。