[实用新型]一种卵母细胞/胚胎玻璃化冷冻载体

说明书

技术领域

本实用新型属于细胞玻璃化冷冻技术领域，特别涉及一种卵母细胞/胚胎玻璃化冷冻载体。

背景技术

1985年，Rall等发明了胚胎玻璃化冷冻保存方法，使得卵母细胞和胚胎的超低温冷冻不再需要借助冷冻仪，程序得到极大地简化。后经许多研究者的改进，目前卵母细胞/胚胎的玻璃化冷冻方法仅需1分钟左右即可完成一个操作。如今常用的冷冻方法主要有以下几种：冷冻条(Cryotop)法、尼龙环玻璃化(Cryoloop)法、冷冻钩(Cryolock)法、开放拉伸细管(OPS，Open-Pulled-Straw)法等。

冷冻条(Cryotop)法于2000年由Kuwayama和Kato发明，它主要是由一个0.4mm宽、0.1mm厚、20mm长的细长形聚丙烯条和一个较硬的塑料柄组成，同时为避免贮存时对聚丙烯条造成机械损伤，在其上套一个长约3cm的塑料套管。在玻璃化冷冻时，胚胎或卵母细胞连带0.1μL的冷冻液借助于虹吸作用被吸入聚丙烯条顶部，然后将塑料细管套上，直接投入液氮保存。解冻时，在液氮内将塑料细管取下，然后将聚丙烯条直接插入解冻液里进行解冻。但是为了降低冻存过程中对细胞的伤害，聚丙烯条的降温速度还需要进一步改进。

尼龙环玻璃化(Cryoloop)法首先由Lane等在1999年提出，该方法将卵母细胞或胚胎在低浓度冷冻液中处理，然后将卵母细胞或胚胎移到附有玻璃化液的尼龙环上，最后将尼龙环投入浸在液氮中的冷冻管内，具有降温速度快、冷冻损伤小的优点。但该方法使得细胞在储存过程中与液氮长时间接触增加了污染的风险，且需要特殊的冷冻管固定装置进行操纵。

实用新型内容

本实用新型针对现有技术中的缺点，提供了一种卵母细胞/胚胎玻璃化冷冻载体。

为了实现上述目的，本实用新型采取的技术方案如下：

一种卵母细胞/胚胎玻璃化冷冻载体，包括尼龙环1、金属杆2、塑料手柄3和塑料套管4；其中，尼龙环1、金属杆2和塑料手柄3依次固定连接，塑料套管4套在塑料手柄3靠近金属杆2的一端。

所述尼龙环1的直径为20um，宽为0.5-0.7mm。

本实用新型的优点为：

1)易于操作，便于储存。该玻璃化载体克服了传统尼龙环载体在冷冻过程中必须使用特殊的长柄螺栓将带有尼龙环的盖子固定到冻存管中的缺陷。同时可在塑料手柄4处对卵母细胞/胚胎的来源、类别、数量加以标识，便于长期贮存。

2)冷冻速度更快，效率更高。该玻璃化冷冻载体粘附极少的冷冻液，降低了操作过程中冷冻液对卵母细胞/胚胎的毒性，卵母细胞/胚胎可直接与液氮接触，提高了降温速率，减小了卵母细胞/胚胎的冷冻损伤。

3)成本低，适应性好。制作该玻璃化冷冻载体的材料为普通商品化的尼龙环和塑料细管，材料来源广泛，规格多样。另外在操作过程中可根据不同物种(人、小鼠、大鼠、猪、牛、羊等)和细胞类型(卵母细胞、胚胎、组织块)选择不同规格的尼龙环1，保证了实验效率和应用范围。

附图说明

图1为一种卵母细胞/胚胎玻璃化冷冻载体示意图。

图2为一种卵母细胞/胚胎玻璃化冷冻载体打开示意图。

具体实施方式

本实用新型提供了一种卵母细胞/胚胎玻璃化冷冻载体，下面结合附图和实施例对本实用新型作进一步描述。

图1所示为一种卵母细胞/胚胎玻璃化冷冻载体示意图。所述卵母细胞/胚胎玻璃化冷冻载体包括尼龙环1、金属杆2、塑料手柄3和塑料套管4；其中，尼龙环1、金属杆2和塑料手柄3依次固定连接，塑料套管4套在塑料手柄3靠近金属杆2的一端。其中尼龙环1的直径为20um，宽为0.5-0.7mm。

实施例

图2所示为一种卵母细胞/胚胎玻璃化冷冻载体打开示意图。该玻璃化冷冻载体的具体使用方法包括如下步骤：

1)EFS30玻璃化冷冻保存液、冷冻预处理液及解冻液的配置。

①EFS30玻璃化冷冻保存液的配置：以乙二醇(Ethyleneglycol：EG)为主体抗冻保护剂，加入聚蔗糖(Ficoll)和蔗糖(Sucrose)制成EFS30玻璃化冷冻保存液。

②冷冻预处理液的配置：按体积比(v/v)将乙二醇溶液稀释成浓度为10％的乙二醇溶液，作为预处理液。

③解冻液的配置：以PBS为基础液配制成0.5M的蔗糖溶液，作为解冻液。

2)冷冻