[发明专利]一种催化活性和比酶活提高的脯氨酰内肽酶突变体有效
| 申请号： | 201580003335.1 | 申请日： | 2015-06-08 |
| 公开（公告）号： | CN106795520B | 公开（公告）日： | 2020-04-21 |
| 发明（设计）人： | 喻晓蔚;徐岩;康超 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/57 | 分类号： | C12N15/57;C12N1/21;C12N15/10;C12N9/58 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 耿晓岳 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 催化 活性 提高 脯氨酰内 肽酶 突变体 | ||
1.一种脯氨酰内肽酶突变体，其特征在于，所述突变体是以亲本米曲霉脯氨酰内肽酶为基础，将其催化活性中心附近或催化关键位点的氨基酸进行突变得到的；所述亲本米曲霉脯氨酰内肽酶的氨基酸序列是SEQ ID NO.1所示的序列，所述突变体是以下任意一种：
T370A、T370C、T516A、T516C、C508H、C508H/Q512R、T516A/T370A、T516A/T370C、T516A/C508H或T516A/C508H/Q512R。
2.含有权利要求1所述突变体基因的表达载体。
3.根据权利要求2所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为分泌型载体。
4.表达权利要求1所述突变体的基因工程菌。
5.一种权利要求4所述基因工程菌的构建方法，其特征在于，所述构建方法是将基因序列如SEQ ID NO.2所示的亲本米曲霉脯氨酰内肽酶基因连接到pPIC9K载体得到pPIC9K-AO-PEP，然后通过定点突变的方法将pPIC9K-AO-PEP突变成含有突变体序列的重组质粒，线性化质粒后转化到毕赤酵母中，即得到表达突变体的基因工程菌。
6.一种提高米曲霉脯氨酰内肽酶催化活性或比酶活的方法，其特征在于，所述方法是以氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的亲本米曲霉脯氨酰内肽酶为基础，将其催化活性中心附近的氨基酸进行突变，即得到催化活性或比酶活提高的脯氨酰内肽酶突变体，所述突变体是T370A、T370C、T516A、T516C、C508H、C508H/Q512R、T516A/T370A、T516A/T370C、T516A/C508H或T516A/C508H/Q512R。
7.权利要求1所述突变体在食品工业中的应用。
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