[发明专利]用于分离外来体的方法和组合物

权利要求书

1.一种从生物流体分离疾病-相关的细胞外微泡的非诊断目的的方法，其中所述的疾病-相关的细胞外微泡在其表面上具有带负电荷的磷脂酰丝氨酸；所述的方法包括将所述的生物流体的样品与以有效地从所述的生物流体沉淀疾病-相关的细胞外微泡的pH和浓度的醋酸盐缓冲剂接触，以及从沉淀物收集疾病-相关的细胞外微泡，从而分离所述的疾病-相关的细胞外微泡。

2.权利要求1所述的方法，其中在所述的疾病-相关的细胞外微泡的表面上的磷脂酰丝氨酸与非-脂质的膜成分相连存在，并且其中所述的非-脂质的膜成分包含膜蛋白。

3.权利要求1所述的方法，其中所述的醋酸盐缓冲剂中和所述的疾病-相关的细胞外微泡上的磷脂酰丝氨酸的表面电荷，由此从所述的生物流体沉淀所述的疾病-相关的细胞外微泡。

4.权利要求1所述的方法，其中所述的生物流体包含细胞外微泡的混合群体，其中包括疾病-相关的和正常的细胞外微泡，并且其中所述的方法从所述的混合群体中选择性地沉淀所述的疾病-相关的细胞外微泡，这与所述的正常的细胞外微泡相反。

5.权利要求1-4的任意一项所述的方法，其中所述的疾病-相关的细胞外微泡在基本上不破坏其形态学特征或功能特征或者细胞表面抗原的条件下被分离。

6.权利要求1-4的任意一项所述的方法，其中所述的细胞外微泡为外来体。

7.权利要求1至4的任意一项所述的方法，其中所述的疾病-相关的细胞外微泡衍生自病毒-感染的细胞。

8.权利要求7所述的方法，其中所述的方法从病毒-感染的细胞分离疾病-相关的细胞外微泡，其中所述的病毒-感染的细胞基本上不具有感染性病毒。

9.权利要求1至4的任意一项所述的方法，其中所述的疾病-相关的细胞外微泡为肿瘤-衍生的细胞外微泡。

10.权利要求9所述的方法，其中所述的肿瘤-衍生的细胞外微泡衍生自黑素瘤、结肠直肠癌、肺癌、胰腺癌、肝癌、前列腺癌、乳腺癌或卵巢癌。

11.权利要求9所述的方法，其中所述的肿瘤-衍生的细胞外微泡为肿瘤-衍生的外来体。

12.权利要求1-4的任意一项所述的方法，其中所述的疾病-相关的细胞外微泡为人类细胞外微泡。

13.权利要求1-4的任意一项所述的方法，其中所述的醋酸盐缓冲剂的pH为4.25至5.25。

14.权利要求13所述的方法，其中所述的醋酸盐缓冲剂的pH为大约4.75。

15.权利要求1-4的任意一项所述的方法，其中所述的醋酸盐缓 冲剂在所述的样品中的最终浓度为0.05M至0.25M。

16.权利要求15所述的方法，其中将1/10体积的1.0M醋酸盐缓冲剂加入至所述的样品中。

17.权利要求1-4的任意一项所述的方法，其中所述的醋酸盐缓冲剂的pH为4.25至5.25，并且在所述的样品中的最终浓度为0.05M至0.25M。

18.权利要求17所述的方法，其中所述的醋酸盐缓冲剂的pH为大约4.75，并且在所述的样品中的最终浓度为大约0.1M。

19.权利要求1-4的任意一项所述的方法，其中所述的醋酸盐缓冲剂包括醋酸钠或醋酸钾。

20.权利要求1-4的任意一项所述的方法，其中所述的醋酸盐缓冲剂实质上不具有除了聚合物以外的体积。

21.权利要求20所述的方法，其中所述的醋酸盐缓冲剂实质上不具有聚乙二醇。

22.权利要求1-4的任意一项所述的方法，其中所述的生物流体为鼠、牛或人类生物流体。

23.权利要求1-4的任意一项所述的方法，其中所述的生物流体为细胞培养物上清液、全血、血清、血浆、腹水、脑脊液、骨髓穿刺液、支气管肺泡洗液、尿、精液、阴道分泌物、黏液、唾液、痰或者从生物组织样品得到的澄清的裂解液。

24.权利要求23所述的方法，其中所述的生物流体为澄清的细胞培养物上清液，其已经经过低速离心。