[发明专利]培养细胞的分化促进方法以及培养细胞分化促进剂

说明书

本发明是能够促进培养细胞的分化的方法以及适用于该方法的培养细胞分化促进剂。通过使含脂环结构的聚合物成型体与被培养的细胞接触，从而诱导细胞的分化。

技术领域

本发明涉及培养细胞的分化促进方法以及培养细胞分化促进剂。

背景技术

近年来，利用了ES细胞、iPS细胞等万能细胞、干细胞的再生医疗备受瞩目。万能细胞、干细胞被称为未进行分化的未分化状态的细胞。在再生医疗中，使这些未分化状态的细胞分化成目标的脏器、组织、细胞，使用得到的脏器、组织、细胞进行患者的治疗。实现了例如使用从患者的皮肤的表皮组织采取的干细胞进行皮肤的再生医疗、美容行为。

皮肤的表皮在从真皮侧至皮肤表面侧的方向具有基底细胞、有棘细胞、颗粒细胞以及角质细胞，基底细胞一边分化成有棘细胞、颗粒细胞、角质细胞，一边转移至上层，最终成为污垢而剥落。

在皮肤的再生医疗中，从受验者的皮肤的最表面的表皮组织采取基底细胞、有棘细胞，将这些细胞一边在培养容器内培养而使其层状地增殖，一边进行分化诱导处理以使层的最外侧的细胞分化成颗粒细胞、接着分化成角质细胞。然后，将通过该分化诱导处理而按照基底细胞、有棘细胞、颗粒细胞、角质细胞的顺序层状地增殖的细胞群(培养表皮)移植至受验者的皮肤。

在上述的分化诱导操作中，作为培养容器，一般通用经亲水化处理的聚苯乙烯制皿、烧瓶等。

已知在构成表皮的细胞内，基底细胞、有棘细胞在钙的浓度增加的环境中分化成颗粒细胞、角质细胞。

此外，在颗粒细胞分化成角质细胞的过程中，角蛋白、内披蛋白(invo lucrin)、兜甲蛋白等构成角质细胞的蛋白质被生物合成。因此，制作培养表皮时，重要的是在培养细胞中这些蛋白质被生物合成。另外，在培养细胞内这些蛋白质被生物合成的情况可以通过检测与各蛋白质对应的mRNA而进行。

如上所述，尽管皮肤的再生医疗技术日益进展，但是现有技术的培养表皮的制作方法不仅费力而且还需要时间，因此存在着在移植手术时来不及培养表皮、与制作培养表皮所需要的工夫、时间成比例地产生高额的费用这样的问题。

因此，期望得到能够进一步促进培养细胞的分化的方法。

作为促进向角质细胞的分化的方法，已知有使用乳酸菌的乳发酵物的方法。在专利文献1中公开有以下技术：通过在人正常表皮细胞的培养基中添加使用瑞士乳酸菌(Lactobacillus helveticus)而得到的乳发酵物，从而作为表皮细胞的分化标记的角蛋白的mRNA增加。此外，示出通过口服该乳发酵物，可促进皮肤表皮的角质化。

然而，该乳发酵物中包含乳酸菌，因此在培养再生医疗用的细胞时所使用的培养基中混入该乳发酵物是不现实的。

此外，已知有使用樱桃提取物促进表皮细胞的分化的方法。在专利文献2中示出：通过将樱桃提取物给予表皮细胞，从而作为分化过程中重要成分的角蛋白10和丝聚合蛋白的mRNA产生显著加快。然而，角蛋白10和丝聚合蛋白是从表皮细胞的分化过程的初期到中期在有棘细胞内合成的，樱桃提取物并没有促进向角质细胞的分化。此外，在专利文献2中记载的技术是以化妆品等外用剂为目标的，很难将该见解直接适用于再生医疗用的表皮细胞的分化的促进。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际专利WO2006/137513号(US2010/0166877)；

专利文献2：日本特开第2012-167048号公报。

发明内容

发明要解决的课题

本发明鉴于这样的现有技术的实际情况而完成的，其课题在于提供能够进一步促进培养细胞的分化的方法以及培养细胞分化促进剂。

用于解决课题的方案