[发明专利]加标签的嗜肝DNA病毒e抗原及其在筛选抗病毒物质中的用途

权利要求书

1.一种用于评估候选分子抑制嗜肝DNA病毒共价闭合环状(ccc)DNA的能力的方法，包括步骤

(a)使包含核酸分子的细胞与所述候选分子接触，所述核酸分子包含编码加标签的嗜肝DNA病毒e抗原的核酸序列；其中所述核酸分子包含编码一个或多个标签的序列和在编码一个或多个标签的序列的5'这样的序列，其能够与嗜肝DNA病毒pgRNA的ε结构形成碱基对，即与对应于HBV基因组位置T1849至T1855的核苷酸形成碱基对，

其中将核酸插入与HBV基因组的位置C1902和位置A1903相对应的核苷酸之间由此获得所述核酸分子，所述核酸包含编码一个或多个标签的序列和在编码一个或多个标签的序列的5'这样的序列，其能够与嗜肝DNA病毒pgRNA的ε结构形成碱基对，即与对应于HBV基因组位置T1849至T1855的核苷酸形成碱基对；

(b)评估加标签的嗜肝DNA病毒e抗原的水平；并且

(c)当加标签的嗜肝DNA病毒e抗原的水平与对照相比降低时选择候选分子。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述嗜肝DNA病毒是乙型肝炎病毒(HBV)并且其中所述嗜肝DNA病毒e抗原是乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述加标签的嗜肝DNA病毒e抗原仅含有一个标签；或其中所述加标签的嗜肝DNA病毒e抗原含有两个或更多个标签。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述标签选自血凝素(HA)标签、His标签、Flag标签、c-myc标签、V5标签和/或C9标签。

5.根据权利要求4所述的方法，

其中编码HA标签的核酸序列在SEQ ID NO:1中显示；

其中编码His标签的核酸序列在SEQ ID NO:2中显示；

其中编码c-myc标签的核酸序列在SEQ ID NO:4中显示；

其中编码V5标签的核酸序列在SEQ ID NO:5中显示；

和/或其中编码C9标签的核酸序列在SEQ ID NO:6中显示；

或

其中HA标签的氨基酸序列在SEQ ID NO:8中显示；

其中His标签的氨基酸序列在SEQ ID NO:9中显示；

其中1×Flag标签的氨基酸序列在SEQ ID NO:10中显示；

其中3×Flag标签的氨基酸序列在SEQ ID NO:14中显示；

其中c-myc标签的氨基酸序列在SEQ ID NO:11中显示；

其中V5标签的氨基酸序列在SEQ ID NO:12中显示；和/或

其中C9标签的氨基酸序列在SEQ ID NO:13中显示。

6.根据权利要求4所述的方法，其中所述Flag标签是1×Flag标签或3×Flag标签。

7.根据权利要求6所述的方法，其中编码1×Flag标签的核酸序列在SEQ ID NO:3中显示；

并且其中编码3×Flag标签的核酸序列在SEQ ID NO:7中显示。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其中核酸分子包含编码嗜肝DNA病毒前核心蛋白的核酸序列。

9.根据权利要求8所述的方法，其中编码嗜肝DNA病毒前核心蛋白的核酸序列是如SEQID NO:15中所显示的乙型肝炎病毒前核心蛋白的核酸序列；或

其中嗜肝DNA病毒前核心蛋白的氨基酸序列是如SEQ ID NO:17中所显示的乙型肝炎病毒前核心蛋白的氨基酸序列。

10.根据权利要求8所述的方法，其中所述编码一个或多个标签的核酸序列在编码乙型肝炎病毒前核心蛋白N端29个氨基酸的核酸序列的3'下游。

11.根据权利要求1或2所述的方法，其中核酸分子包含嗜肝DNA病毒基因组。